分光光度計的基本工作原理是基于物質(zhì)對光(對光的波長)的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶,，所以，當(dāng)光色散后的光譜通過某一溶液時,，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系，即符合比爾定律,。
T = I/Io lg(Io/I)=εcb
式中，T為透過率,，Io為入射光強(qiáng)度,，I為透射光強(qiáng)度,，A為消光值(吸光度),，ε為吸收系數(shù)，b為溶液的光徑長度,，c為溶液的濃度,。從以上公式可以看出，當(dāng)入射光,、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時,，透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
721型分光光度計的構(gòu)造
721型分光光度計允許的測定波長范圍在360～800nm,，其構(gòu)造比較簡單,，測定的靈敏度和精密度較高,。因此，應(yīng)用比較廣泛,。
721型分光光度計的儀器構(gòu)造見下圖,。
從光源燈發(fā)出的連續(xù)輻射光線，射到聚光透鏡上,，會聚后,，再經(jīng)過平面鏡轉(zhuǎn)角90°，反射至入射狹縫,。由此入射到單色器內(nèi),，狹縫正好位于球面準(zhǔn)直物鏡的焦面上，當(dāng)入射光線經(jīng)過準(zhǔn)直物鏡反射后,，就以一束平行光射向棱鏡,。光線進(jìn)入棱鏡后，進(jìn)行色散,。色散后回來的光線,，再經(jīng)過準(zhǔn)直鏡反射，就會聚在出光狹縫上,，再通過聚光鏡后進(jìn)入比色皿,，光線一部分被吸收，透過的光進(jìn)入光電管,，產(chǎn)生相應(yīng)的光電流,，經(jīng)放大后在微安表上讀出。
721型分光光度計的使用方法
①首先接通電源,，打開電源開關(guān)1,，指示燈亮，打開比色皿暗箱蓋8,，預(yù)熱20分鐘,。
②波長選擇旋鈕6，選擇所需的單色光波長,，用靈敏度旋鈕2選擇所需的靈敏檔,。
③放入比色皿，旋轉(zhuǎn)零位旋鈕5調(diào)零,，將比色皿暗箱蓋合上,，推進(jìn)比色皿拉桿3，使參比比色皿處于空白校正位置,，使光電管見光,，旋轉(zhuǎn)透光率調(diào)節(jié)旋鈕4，使微安表9指針準(zhǔn)確處于100%,。按上述方法連續(xù)幾次調(diào)整零位和100%位,，即可進(jìn)行測定工作(儀器面板見 圖5-6),。
721型分光光度計使用和維護(hù)中應(yīng)注意事項：
①連續(xù)使用儀器的時間不應(yīng)超過2小時，hao是間歇0.5小時后,，再繼續(xù)使用,。
②比色皿每次使用完畢后，要用去離子水洗凈并倒置晾干后,，存放在比色皿盒內(nèi),。在日常使用中應(yīng)注意保護(hù)比色皿的透光面，使其不受損壞或產(chǎn)生劃痕,，以免影響透光率,。
③儀器不能受潮。在日常使用中,，應(yīng)經(jīng)常注意單色器上的防潮硅膠(在儀器的底部)是否變色,，如硅膠的顏色已變紅，應(yīng)立即取出烘干或更換,。
④在托運或移動儀器時,，應(yīng)注意小心輕放。