液相色譜（high performance liquid chromatography, HPLC）也叫高壓液相色譜（high pressure liquid chromatography）,、高速液相色譜（high speed liquid chromatography）,、高分離度液相色譜（high resolution liquid chromatography）等,。是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上,，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的,。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力,，需用高壓輸送流動相,，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜,。    液相色譜是目前應用zui多的色譜分析方法,，液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵,、進樣器,、色譜柱、檢測器和記錄器組成,，其整體組成類似于氣相色譜,，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整,。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進樣系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴密,；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體,，為了減低柱壓液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱,。HPLC應用非常廣泛,，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。     使用液相色譜時,，液體待檢測物被注入色譜柱,，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,，不同的物質順序離開色譜柱,，通過檢測器得到不同的峰信號，zui后通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質,。液相色譜作為一種重要的分析方法,，廣泛的應用于化學和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質的差別,，它的特點是采用了高壓輸液泵,、高靈敏度檢測器和微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā),、分子量大,、不同極性的有機化合物。發(fā)展歷史：    1960年代,，由于氣相色譜對高沸點有機物分析的局限性,，為了分離蛋白質、核酸等不易氣化的大分子物質,，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜,。1960年代末科克蘭（Kirkland）、哈伯,、荷瓦斯（Horvath）,、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上*臺液相色譜儀,，開啟了液相色譜的時代,。液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數(shù),，以高壓驅動流動相,，使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內完成。     1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實踐》一書,，標志著液相色譜法 （HPLC）正式建立,。在此后的時間里,，液相色譜成為zui為常用的分離和檢測手段，在有機化學,、生物化學,、醫(yī)學、藥物開發(fā)與檢測,、化工,、食品科學、環(huán)境監(jiān)測,、商檢和法檢等方面都有廣泛的應用,。液相色譜同時還極大的刺激了固定相材料、檢測技術,、數(shù)據(jù)處理技術以及色譜理論的發(fā)展,。     1960年代前，使用的填充粒大于100μm,，提高柱效面臨著困境，后來的研究人員便采用微粒固定相來突破著一瓶頸,?？瓶颂m、荷瓦斯制備成功薄殼型固定相,，這種在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄殼,，實現(xiàn)了高速傳質，為液相色譜技術的發(fā)展奠定了穩(wěn)固的基礎,。隨著填料粒徑的降低,，更高的柱效也得以實現(xiàn)。1960年代研制出氣動放大泵,、注射泵及低流量往復式柱塞泵,，但后者的脈沖信號很大，難以滿足液相色譜的要求,。1970年代,，往復式雙柱塞恒流泵，解決了這一問題,。1970年代后科克蘭制備出全多孔球形硅膠,，平均粒徑只有7μm，具有*的柱效,，并逐漸取代了無定形微粒硅膠,。之后又制造出的鍵合固定相使柱的穩(wěn)定性大為提高，多次使用成為可能,。1970年后,，適合分離生物大分子的填料又成為研究的熱點,。1980年后，改善分離的選擇性成為色譜工作者的主要問題,，人們越來越認識到改變流動相的組成事提高選擇性的關鍵,。 液相色譜的特點：高壓——壓力可達150～300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上,。高速——流速為0.1～10.0 mL/min,。——塔板數(shù)可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種,。高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng,。同時消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：速度快——通常分析一個樣品在15～30 min,，有些樣品甚至在5 min內即可完成,。分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到*分離效果。靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng,，熒光和電化學檢測器可達0.1pg,。色譜柱可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。樣品量少,，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,，可以收集單一組分或做制備。如想購買液相色譜儀請咨詢得潤儀器公司：彭