蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測
酶抑制率法（分光光度法）試劑使用說明
      本試劑為國家標(biāo)準(zhǔn)快速檢驗方法GB/T5009.199-2003的配套試劑。酶活性和對農(nóng)藥的靈敏度指標(biāo)均達(dá)到或超過了國家標(biāo)準(zhǔn)要求,，可以在各種型號的農(nóng)藥殘毒檢測儀（分光光度法）上使用，具有穩(wěn)定性好,、靈敏度高和使用方便等特點。
一,、試劑配制
1. 緩沖液試劑： 整包倒入大燒杯中,，加1000mL純凈水溶解，酸堿度為pH8.0,，常溫保存,；
2. 乙酰膽堿酯酶： 取一支酶粉加20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存,，一周內(nèi)用完,。也可將溶解后的酶液分成幾個小瓶，將其冷凍,，用時融化,，但不能重復(fù)多次冷凍、化解,。
3. 顯色劑： 取一支顯色劑加入20mL緩沖溶液,，避光保存；
4. 底物：取一支底物加20mL緩沖溶液,，搖勻后置4℃冰箱中保存,；
二、分析步驟
1. 樣品處理： 選取有代表性的蔬菜樣品,，沖洗掉表面泥土,，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g,，（非葉菜類取2g）放入燒杯或提取瓶中,，加入5mL緩沖溶液，手搖振蕩1～2分鐘,，或超聲波振蕩30秒鐘，倒出提取液,，靜置3~5min,，待用。
2. 對照溶液測試： 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑,，再加入2.5mL緩沖溶液,，搖勻后于37°C放置15min，加入100微升底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng),，應(yīng)立即放入儀器比色池中,，記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時的吸光度A2，A2-A1=DA0,。
3. 樣品溶液測試： 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑,，再加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同,，記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時的吸光度A2,，A2-A1=DAt。
三,、結(jié)果計算
結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示,。
抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
      當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,，樣品為陽性結(jié)果,。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。
      對陽性結(jié)果的樣品,，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量,。
四、注意
1. 每批樣品的控制時間,、溫度條件必須與對照溶液的條件*一致,。
2. 蔥、蒜,、蘿卜,、韭菜、芹菜,、香菜,、茭白、蘑菇及番茄汁液中,，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,，不要剪的太碎,。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也不要剪的太碎,。
3. 當(dāng)溫度條件低于37°C,，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長,，延長時間的確定,，應(yīng)以膽堿酯酶對照溶液測試得到的吸光度A2-A1≥ 0.3以上,，即可往下操作。當(dāng)對照溶液酶液的加入量大一些時,，也可使A2-A1≥0.3上,。
4. 當(dāng)吸光度大到無法讀取時，說明測定液渾濁有干擾,。
五,、產(chǎn)品有關(guān)技術(shù)指標(biāo)
1. 代表性農(nóng)藥的檢出下限見下表
農(nóng)藥名稱 檢出限mg/kg 標(biāo)準(zhǔn)要求檢出限mg/kg
甲安磷 0.65 2.0
氧華了果 0.5 0.8
2敵畏 0.01 0.1
呋南丹 0.01 0.3
2. 乙酰膽堿酯酶的活性：（室溫20°C以上進(jìn)行實驗）DA0≥0.3。
六,、包裝及保存條件
每包可做200份樣品,，0°C以下冰箱冷凍保質(zhì)期為三年，配成試劑后保存期為一周,。