細胞的復蘇實驗

一. 實驗前準備：

1.將水浴鍋預熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等,。
二．取出凍存管：

1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

2.從液氮罐中取出細胞盒,，取出所需的細胞,，同時核對管外的編號。
三．迅速解凍：

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動,，使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內(nèi)。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液：

1.吸棄上清液,。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,，吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數(shù)：細胞濃度以5×105/ml為宜,。
七.培養(yǎng)細胞：

將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),，將培養(yǎng)瓶放入37℃5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定,。

初學者易犯錯誤：

1.一次復蘇細胞過多,，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染,。
 

2水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃,。

3.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導致傳熱不佳,，使融化時間延長,。

4.離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失,。