日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您,? 在線咨詢

免疫組化實驗要點

來源:毓秀生物科技(上海)有限公司   2019年05月30日 09:56  

 

樣本來源   

對于IHC,,組織是來自患者或動物,,經(jīng)過冷凍或石蠟包埋,。然后切成約4μm厚的切片,。對于ICC,,大部分細胞外基質(zhì)被去除,,只剩下整個細胞來染色,,來源可以是細胞懸液,,或組織培養(yǎng)細胞系,。

然而IHC遠遠不止于把抗體放在組織切片上、然后用顯微鏡觀察那么簡單,。要想得到實用,、可靠而清晰的結果,就需要耐心的對每一步進行優(yōu)化,。根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法和免疫酶法,,R&DSystems的網(wǎng)站列出了IHC/ICC實驗設計和優(yōu)化的變量及影響因素如下:

樣本類型:組織或細胞

樣本制備:組織(石蠟或冰凍),細胞:(貼壁細胞或細胞懸液

適當對照:無一抗,,組織類型,。

固定方法:灌注或浸泡。

固定劑:甲醛,,醇類,,丙酮。

封閉液:正常血清,,牛血清蛋白(BSA)或脫脂奶粉,。

抗原修復:蛋白酶,加熱。

檢測方法:直接或間接

一抗:物種

二抗:物種

標記物:熒光或酶(顯色)

復染劑:蘇木精或DAPI(熒光)

封片劑:抗淬滅或水性

顯微鏡觀察:熒顯微鏡或光學顯微鏡

處理不同樣本的區(qū)別 

ICC需要透化,,要么通過固定過程,,要么是單獨的透化步驟,而IHC可能不需要單獨的透化步驟,,這取決于切片的厚度和固定方法,。包埋在石蠟中的組織樣本在抗體染色前需要進一步處理。一旦處理好樣品,,IHCICC的染色操作就幾乎沒什么差異了,。

樣本固定和制備

組織石蠟包埋前的組織固定:4%甲醛固定劑是組織灌注和浸潤固定的常用溶液,一般需要424h,,能很好地保留組織形態(tài),,切片機切片,貼附于載玻片干燥,,石蠟切片存儲室溫多年,,后續(xù)進行IHC/ICC之前需要再水化,需要抗原修復,。

培養(yǎng)細胞固定:2%甲醛室溫固定20min,,細胞樣本貼附載玻片,對于貼壁細胞直接放在6孔或24孔底部的無菌載玻片上生長,,懸浮細胞可通過與包被多聚賴氨酸的載玻片孵育10min而附著在載玻片上,。

冰凍組織切片固定:切片后用醇類固定,用于檢測磷酸化依賴的表位,,在低溫箱進行樣本切片,,冰凍切片存儲–80℃多達一年。通常保留酶的活性和抗原功能,,不需要抗原修復,,冰晶的形成可能負面影響組織結構。

免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,,應在授權范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
  • 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任,。
  • 如涉及作品內(nèi)容,、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,,否則視為放棄相關權利,。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618