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國產(chǎn)液相色譜柱的色譜填料選擇解析
國產(chǎn)液相色譜柱的構(gòu)造由柱管,、填料壓帽,、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片),、接頭,、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,，壓力不高于70 kg/cm2時(shí),，也可采用厚壁玻璃或石英管。為提高柱效,，減小管壁效應(yīng),，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光,。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2-20µm(5-10µm),取決于填料粒度,，目的是防止填料漏出,。
現(xiàn)代液相色譜中,，分離效果好壞的一個(gè)重要指標(biāo)是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,，因此,，要做合適的選擇，必須對此有一定的認(rèn)識(shí)和了解：
1.硅膠基質(zhì)填料
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正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán),，如（NH2，APS）和氰基團(tuán)（CN,，CPS）的鍵合相填料,。
由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,，即極性較弱的組份z先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低,，如正已烷,，CHCl3，二氯甲烷等,。
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反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相,。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng),，通常為水、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物,。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分z先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。
常用的反向填料有：C18,、C8、C4,、C6H5等,。
2.聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1-14均可使用,。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低。
3.其它無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料,。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性,。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體,，由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可以用于HPLC,。氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可以在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用,。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制,，所以未能廣泛應(yīng)用,。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH1-14,，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料是近幾年才開始研究,，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度,，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行之中。
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