- 色譜柱的使用:
a、使用前
色譜柱的儲存液無特殊說明,,均為評價報告所示的流動相,。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶,。在反相色譜中,,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,,堵塞色譜柱,。
b、樣品
樣品也要盡可能清潔,,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對樣品進(jìn)行預(yù)處理,;若樣品不便處理,,要使用保護(hù)柱,。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水,。
c,、色譜柱的保存
如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下,。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑或柳硫汞)中,,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度恰當(dāng)?shù)氖鞘覝亍?/span>
d,、色譜柱的再生
因為色譜柱是消耗品,,隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,,會出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,,一般來說可能是柱效下降,。
(1)、反相柱的再生:依次采用20~30倍的色譜柱體積的甲醇/水=10/90 (V/V),、乙腈,、異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,完成后再以相反順序沖洗色譜柱,。
(2)、正相柱的再生:依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷,、異丙醇,、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,,然后再以相反的順序沖洗色譜柱,。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水,。
5、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高,,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,,屬于正常現(xiàn)象,。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),,可能的原因有如下幾點(diǎn):
a、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染,;
b,、色譜柱頭的填料被樣品污染;
c,、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑,形成結(jié)晶析出,;
d,、流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決辦法如下:
a,、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,,后再用純水超聲10分鐘,,重新裝入色譜柱。
b,、如確定色譜柱頭的填料被污染,,將柱頭螺絲卸下,,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,,用相同的柱填料重新填入,,仔細(xì)修復(fù)后,,重新安裝上柱頭螺絲,。
c、如確定是鹽結(jié)晶,,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,,再換高濃度甲醇。
d,、如果因PH值使用不當(dāng),,很難恢復(fù)。
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