操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80U/mL | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
40U/mL | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
20 U/mL | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
10 U/mL | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
5 U/mL | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié):
1.準備試劑,,樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品,
3.洗板5次,,加入酶標試劑,,
4.洗板5次,加入顯色液A,、B,,
5.加入終止液
6.15分鐘之內(nèi)度OD值
7.計算
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實際濃度,。
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