PART 1/二氧化碳培養(yǎng)箱消毒

二氧化碳培養(yǎng)箱中的微生物往往會對培養(yǎng)的結果產生一定的影響,，常見的微生物處理方式包括物理過濾和滅菌,，下面讓我們一起來探討兩種方式。

1.1 物理過濾  將箱體內氣體通過過濾器循環(huán),，使箱體內氣體潔凈度達到一定的級別(常見UPLA過濾器為1級,、HEPA 過濾器為 100 級),；主要作用是保持箱體內潔凈度，保證培養(yǎng)箱體內的環(huán)境,，但對微生物及病毒不起到任何的殺滅作用，僅僅是將箱體內的微生物過濾到過濾器內,，這樣需要對過濾器進行定期更換,，采用物理過濾的培養(yǎng)箱更適合于環(huán)境條件較好的實驗室。

1.2 滅菌  殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞),，使之達到無菌程度,。經過滅菌的物品稱“無菌物品”，培養(yǎng)箱內的無菌處理是指殺滅所謂微生物,、病毒等,，*避免環(huán)境對樣本的影響，以及消除不同樣本之間的交叉污染,。根據不同的去除對象以及應用環(huán)境需求,，采用有效的方法。

1.2.1 微生物分類

根據微生物的抵抗能力不同,，可將微生物分為如下幾類：

① 細菌繁殖體  易被一般的消毒劑殺滅,，一般革藍氏陽性細菌對消毒劑較敏感，采用化學消毒效果較為明顯,； 革藍氏陰性桿菌則常有較強的抵抗力,，一般的化學消毒效果不明顯，但對熱敏感,，采用熱力學方法效果明顯,。

② 細菌芽孢和真菌芽胞  有厚厚的孢子壁，對化學消毒劑有較強的抵抗力,，一般的化學消毒對芽孢效力有限,；消毒能力強的化學試劑對芽孢有一定的殺滅作用，但對濃度,、處理方法等要求嚴格,；常見的方法是采用熱力學方法。

③ 病毒  種類較多,，不同病毒種類對外界的抵抗能力不同,，化學試劑消毒的效果也不相同，RNA活性受溫度影響明顯,，一般采用熱力學方法去除,。

④ 真菌  普遍對環(huán)境抵抗能力強，一般的紫外消毒方式和化學試劑消毒達不到預期的效果,，通常采用熱力學方法處理,，煮沸或使用高壓滅菌燈,。

1.2.2 熱力學滅菌方法

培養(yǎng)箱內常見的熱力學滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。

①干熱滅菌 將箱體內加熱到120℃以上,，濕度為20% 以內,，持續(xù)一定的時間，通過高溫使蛋白質及核酸變性失活,，達到殺滅的目的,。有些真菌芽孢，由于厚厚的細胞壁保護,，能夠抵抗一定的高溫,，滅菌不能*。

②濕熱滅菌 在高溫的同時保持箱體內飽和濕度,，達到*滅菌效果,。
 

濕熱滅菌相比于干熱滅菌，主要優(yōu)點是：

①濕熱滅菌中的菌體吸收水分,，蛋白質含水量增高,，所需凝固溫度降低，易凝固變性,；

②高溫水蒸汽對蛋白質有*的穿透力,，從而加速蛋白質變性而迅速死亡；

③蒸汽有潛熱存在,，能迅速提高菌體的溫度,，從而增加滅菌效力。

由此可見,，培養(yǎng)箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果的滅菌方法,，能*消滅細菌、真菌,、孢子,、病毒等微生物且沒有二次污染。一個季度采用一次高溫滅菌,，消除潛在的污染風險,。

PART 2/二氧化碳培養(yǎng)箱維護

居安思危，防患于未然,，是智者避免災禍的良方,，是降低損失的措施。二氧化碳培養(yǎng)箱的日常維護就是良方,，做好以下幾個方面可以大大降低污染的概率:

2.1  重視管理  安全為目的,，實驗室內的工作人員應明白自身的態(tài)度和人為因素對實驗環(huán)境的重要性。定期對系統(tǒng)進行校正，至少每年一次,。各項數值一旦固定后,，不要隨意調節(jié)，以免影響箱內溫度,、濕度,、CO2濃度的波動，降低機器的靈敏度,，同時還會影響培養(yǎng)箱內的細胞生產狀態(tài),。

2.2  規(guī)范操作  必須穿著實驗服，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套,。實驗操作時必須配帶一次性手套,，特別是打開培養(yǎng)箱前,，必須先用75%的酒精噴洗雙手,，再取出培養(yǎng)箱中的細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后,，再放回培養(yǎng)箱時,，同樣也要先噴酒精消毒。培養(yǎng)箱的兩個門開關?。ǚ牛┪镆杆?，否則會影響CO₂的濃度、溫度和濕度,，造成污染,。切記開門時不要對著培養(yǎng)箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏,。

2.3  清潔  去除灰塵,、污垢和有機污漬。粉塵,、污物以及有機物是微生物的棲身之所,，并可能影響除污染劑（抗菌劑、化學殺菌劑以及消毒劑）的作用,，必須先經過清潔才能實現消毒和滅菌的目的,。

2.4  消毒抑菌  醫(yī)用酒精可以很好地起到消毒作用，日?？墒褂?5%的酒精對培養(yǎng)箱主體和內部進行擦拭,，一個月一次即可。培養(yǎng)箱內部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液,，硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果,。

以上就是本次“二氧化碳培養(yǎng)箱消毒及日常維護”小課堂全部內容，知識點已經用紅字標出，請時常翻開本篇內容溫故知新,。