蛋白質(zhì)純化后,，大家是如何保存的呢？有沒(méi)有遇到過(guò)不同批次純化的蛋白，采用同樣的測(cè)試方法,，活性卻不太一樣？有沒(méi)有遇到過(guò)新純化的蛋白,，從低溫培養(yǎng)箱拿出融化后,，居然沉淀了？蛋白質(zhì)畢竟是生物體內(nèi)的大分子,，提純后如果保存不當(dāng),，會(huì)很容易失活變性。 下面喆圖小編就帶大家聊一聊純化后蛋白的保存問(wèn)題,。

        原則
保存蛋白質(zhì)應(yīng)該遵循下面這幾個(gè)原則:

        1. 低溫
        低溫下保存蛋白質(zhì)是極其必要的,。低溫意味著更低的能量，低溫下蛋白質(zhì)分子熱運(yùn)動(dòng)較低,，其內(nèi)部的成鍵不容易斷裂,。另外，在低溫下,，微生物不容易生長(zhǎng),，可能存在的蛋白酶的活性也會(huì)很低，這些更容易保證蛋白質(zhì)的活性,。

        2. 分裝
        蛋白質(zhì)有時(shí)候是需要冷凍保存的,，但我們使用蛋白質(zhì)時(shí)卻是在室溫或者更高的溫度。凍融這一過(guò)程會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)造成不可逆的損傷,。因此我們需要盡量減少凍融的次數(shù),。純化后的蛋白質(zhì)，進(jìn)行分裝保存,，每次需要多少便融化多少,，保證蛋白質(zhì)樣品只經(jīng)歷一次凍融。

        3. 濃縮
        純化后的蛋白質(zhì)盡量以高濃度保存,，濃度在1mg／ml以上,，高濃度更有利于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定。高濃度的另一個(gè)好處是防止蛋白質(zhì)分子黏貼在塑料或玻璃材質(zhì)的管壁上,。不要驚訝喲,，疏水性蛋白質(zhì)是很容易粘貼在管壁上的,。

        4. 速凍／速融（Flash freeze）
        在蛋白質(zhì)溶液冷凍的過(guò)程中，純水首先結(jié)冰,，蛋白質(zhì)分子會(huì)被暴露在*的鹽濃度或pH下,，這會(huì)破壞蛋白的活性。因此,，需要盡可能縮短冷凍的過(guò)程,。速凍可以在液氮中進(jìn)行，也可以在干冰,，乙醇和丙酮的混合物中進(jìn)行,。速凍后，蛋白質(zhì)可以保存在-20度或-80度的低溫保存箱中,。同樣的道理,，蛋白質(zhì)融化的過(guò)程也要盡可能的快速，可以在溫水中進(jìn)行,。

        5. 添加劑
        蛋白質(zhì)需要保存在合適的緩沖液中,。同時(shí)緩沖液中還可以添加一些保護(hù)劑，比如保存在-20度時(shí),，可以添加10%-50%的甘油,，這樣可以防止蛋白質(zhì)冷凍，不需要經(jīng)歷凍融,。同時(shí)還可以添加一些抗菌試劑,，比如NaN3（sodium azide），可以防止細(xì)菌生長(zhǎng),?；蛘叩鞍酌敢种苿≒MSF），抑制蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的破壞,。另外,，還可以添加一些還原劑，如DTT,，防止蛋白質(zhì)的氧化,。在選擇添加劑時(shí)，一定要保證所加試劑不會(huì)影響到蛋白的活性,。

        保存方法
        蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇*取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白,。

        短期保存（1周內(nèi)）：
        對(duì)于短期保存，大多數(shù)蛋白可以保存在4 攝氏度下,。4攝氏度下保存面臨MAX大的問(wèn)題是微生物的污染,。因此，如果保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí)，建議利用0.22 um的濾膜過(guò)濾樣品,，除菌后保存在無(wú)菌的管子中,。值得注意的是，并不是所有的蛋白質(zhì)都適合保存在4度下,。

        長(zhǎng)期保存：
        對(duì)于長(zhǎng)期保存,，冷凍是必須的,。蛋白質(zhì)溶液在速凍后可以在-20度或-80度中進(jìn)行,，-80度下的蛋白可以保存更長(zhǎng)久。長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)的另一個(gè)方式是凍干（lyophilization）,。蛋白質(zhì)凍干后會(huì)呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式,，處于*脫水的狀態(tài)，可以在低溫保存箱中無(wú)限期保存,。然而,，對(duì)于某些蛋白質(zhì)，凍干操作有一個(gè)潛在問(wèn)題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶,。凍干／復(fù)溶的過(guò)程同樣會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用,。

        注意事項(xiàng)
        1. 無(wú)菌
進(jìn)行蛋白質(zhì)操作實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要帶手套。實(shí)驗(yàn)室中戴手套多是為了保護(hù)自己,，但在生化實(shí)驗(yàn)中,，蛋白質(zhì)卻是需要我們保護(hù)的對(duì)象。我們的皮膚上有一些蛋白酶,，這些蛋白酶很可能會(huì)降解掉我們的蛋白樣品,。皮膚上的其他化學(xué)分子也可能會(huì)污染蛋白樣品。另外,，為了防止細(xì)菌的生長(zhǎng),，蛋白質(zhì)建議保存在滅菌的小管中。

        2.避免震蕩
        震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用,。震蕩時(shí)溶液中會(huì)產(chǎn)生氣泡,，氧氣的進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸,，其極易被氧化為胱氨酸,，這一過(guò)程很可能會(huì)破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。