離心機的分離方法：

1. 差速沉降離心法：

這是*普通的離心法,。即采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進行離心,，使沉降速度不同的顆粒，在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法,。此法一般用于分離沉降系數(shù)相差較大的顆粒,。
   差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時間。當以一定的離心力在一定的離心時間內(nèi)進行離心時,，在離心管底部就會得到*大和*重顆粒的沉淀,，分出的上清液在加大轉(zhuǎn)速下再進行離心，又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液,，如此多次離心處理,，即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉淀是不均一的,，仍雜有其它成分,，需經(jīng)過2～3次的再懸浮和再離心，才能得到較純的顆粒,。

此法主要由于組織勻漿液中分離細胞器和病毒,，其優(yōu)點是：操作簡易，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,，并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子,。缺點是：須多次離心，沉淀中有夾帶,，分離效果差,，不能一次得到純顆粒，沉淀于管底的顆粒受擠壓,，容易變性失活,。
2. 密度梯度區(qū)帶離心法（簡稱區(qū)帶離心法）：

區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,，形成不同區(qū)帶的分離方法,。此法的優(yōu)點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒,；②適應(yīng)范圍廣,，能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒,；③顆粒不會擠壓變形,，能保持顆粒活性,，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合,。

此法的缺點是：①離心時間較長；②需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液；③操作嚴格,，不易掌握,。
密度梯度區(qū)帶離心法又可分為兩種：

（1）差速區(qū)帶離心法：當不同的顆粒間存在沉降速度差時（不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差）。在一定的離心力作用下,，顆粒各自以一定的速度沉降,，在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒（20% 的沉降系數(shù)差或更少）或分子量相差3倍的蛋白質(zhì),，與顆粒的密度無關(guān),，大小相同，密度不同的顆粒（如線粒體,，溶酶體等）不能用此法分離。

離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液,，樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上,，離心時，由于離心力的作用,，顆粒離開原樣品層,，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時間后,，沉降的顆粒逐漸分開,，*后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶，沉降系數(shù)越大,，往下沉降越快,，所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低，離心必須在沉降*快的大顆粒到達管底前結(jié)束,，樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度,。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液，其*大密度和濃度可達1.28 kg/cm3和60％,。此離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和時間,。

（2）等密度區(qū)帶離心法：離心管中預(yù)先放置好梯度介質(zhì)，樣品加在梯度液面上,，或樣品預(yù)先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管,，通過離心形成梯度，這就是預(yù)形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式,。離心時,，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,，形成幾條不同的區(qū)帶,，這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態(tài)后，再延長離心時間和提高轉(zhuǎn)速已無意義,，處于等密度點上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時間所影響,，提高轉(zhuǎn)速可以縮短達到平衡的時間，離心所需時間以*小顆粒到達等密度點（即平衡點）的時間為基準,，有時長達數(shù)日,。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大,，分離效果越好,，與顆粒大小和形狀無關(guān)，但大小和形狀決定著達到平衡的速度,、時間和區(qū)帶寬度,。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化絕CSCl，其密度可達1.7g/cm3,。此法可分離核酸,、亞細胞器等，也可以分離復(fù)合蛋白質(zhì),，但簡單蛋白質(zhì)不適用,。
收集區(qū)帶的方法有許多種，例如：
   （1） 用注射器和滴管由離心管上部吸出,。
   （2） 有針刺穿離心管底部滴出,。
   （3） 用針刺穿離心管區(qū)帶部份的管壁，把樣品區(qū)帶抽出,。
   （4）用一根細管插入離心管底,，泵入超過梯度介質(zhì)*大密度的取代液，將樣品和梯度介質(zhì)壓出,，用自動部分收集器收集,。