熒光顯微鏡DM1000FL的應用域

熒光顯微鏡DM1000FL的應用域

熒光顯微鏡DM1000FL的應用域

    熒光顯微鏡的原理和結構特點：熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源，經過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發(fā)光,、激發(fā)標本內的熒光物質發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下,，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高，主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究,。熒光顯微鏡的基本構造是由普通光學顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束

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     熒光顯微鏡的原理和結構特點：熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源,，經過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發(fā)光,、激發(fā)標本內的熒光物質發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察,。這樣在強烈的對襯背景下,，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高,，主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究,。熒光顯微鏡的基本構造是由普通光學顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片,、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎上組成的,。熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W)，它可發(fā)出各種波長的光,，但每種熒光物質都有一個產生強的熒光的激發(fā)光波長,，所以需加用激發(fā)濾片（一般有紫外、紫色,、藍色和綠色激發(fā)濾片）,，僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標本上，而將其他光都吸收掉,。每種物質被激發(fā)光照射后,，在極短時間內發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性,，一般都比激發(fā)光弱,，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片,。

它的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進入目鏡,、以免于擾熒光和損傷眼睛，二是選擇并讓特異的熒光透過,，表現(xiàn)出專一的熒光色彩,。兩種濾光片必須選擇配合使用。

熒光顯微鏡就其光路來分有兩種：
1．透射式熒光顯微鏡: 激發(fā)光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發(fā)熒光的,。常用暗視野集光器,，也可用普通集光器，調節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉射和旁射到標本上．這是比較舊式的熒光顯微鏡,。其優(yōu)點是低倍鏡時熒光強,，而缺點是隨放大倍數增加其熒光減弱．所以對觀察較大的標本材料較好。

2．落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,，與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,，即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡,。光路中需加上一個雙色束分離器，它與光鈾呈45,。角,，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上,，樣品所產生的熒光以及由物鏡透鏡表面,、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡，反回到雙色束分離器,，使激發(fā)光和熒光分開,，殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的組合插塊,，可滿足不同熒光反應產物的需要,。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻，成像清晰,，放大倍數愈大熒光愈強,。

（二）熒光顯微鏡使用方法．
1．打開燈源，超高壓汞燈要預熱幾分鐘才能達到高亮點,。 
2．透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片,，在物鏡的后面裝上相應的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的插塊,。 
3．用低倍鏡觀察,，根據不同型號熒光顯微鏡的調節(jié)裝置，調整光源中心,，使其位于整個照明光斑的中央,。 
4．放置標本片，調焦后即可觀察,。 使用中應注意：末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷,；用油鏡觀察標本時,，必須用無熒光的特殊油鏡；高壓汞燈關閉后不能立即重新打開,，需經5分鐘后才能再啟動,，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命,。
(三)觀察 在示教臺上的熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片,，可見經o．01％的丫啶橙熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發(fā)產生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色),。