非洲豬瘟病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒(A盒)
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【產(chǎn)品名稱】:非洲豬瘟病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒
【包裝規(guī)格】:25T/盒 & 50T/盒
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品適合于從血清,、血漿、牛奶,、體液,、培養(yǎng)液、組織勻漿液,、拭子等樣品中提取病毒RNA或DNA,。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù),提取過程中無需使用有毒的酚抽提,,也無需進行耗時的醇類沉淀,。獲得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR、PCR,、Northern雜交,、以及各種病毒檢測等。
【主要組成成份】
組成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
純化柱 | 25個 | 50個 |
2ml 收集管 | 25個 | 50個 |
蛋白酶K(B盒) | 600µl | 1.2ml |
裂解液(Buffer AL) | 10ml | 20 ml |
洗滌液(Buffer RW) | 50ml | 100 ml |
Nuclease Free Water | 5 ml | 10 ml |
【儲存條件及有效期】
本產(chǎn)品部分組份(不含蛋白酶K)保存于室溫(15-25℃),,有效期12個月,,長期保存時需置于2-8℃;蛋白酶K保存于-20℃,,有效期12個月,。
【注意事項】
1、自備無水乙醇(96-100%),、自備離心管;
2,、為避免其他核酸的污染,必須使用不含DNA和RNA的離心管,、吸管,、槍頭、試劑和手套,,操作人員須戴口罩;
3,、避免反復(fù)凍融蛋白酶 K,會影響其活性,。
【操作步驟】
1. 轉(zhuǎn)移20 µl 蛋白酶K至1.5ml離心管中,。
2. 轉(zhuǎn)移200 µl樣品,如血清、血漿,、尿液,、培養(yǎng)液上清、或其它無細胞體液至裝有蛋白酶K的離心管中,震蕩混勻5s,。若樣品不足200µl,,用Buffer PBS或無核酶水補足,。(咽/口腔拭子,或固體組織樣品先用Buffer PBS浸泡或勻漿后,離心取上清進行操作,。)
3. 加入200µl 裂解液 至步驟2的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置10min,。
4. 加入250µl無水乙醇 至步驟3的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置3min。
5. 把 純化柱 裝在2ml收集管中,,轉(zhuǎn)移步驟4的混合液至純化柱中,。12,000rpm離心1min。
6. 倒棄濾液把純化柱裝回收集管中,加入650 µl 洗滌液 至純化柱中,12,000rpm離心1min,。
7. 按照步驟6重復(fù)一次,。
8. 倒棄濾液把純化柱套回收集管,12,000rpm離心空柱2min甩干純化柱。
9. 將純化柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管,加入50µl Nuclease Free Water至純化柱的膜中央,,室溫靜置1min,,12,000rpm離心1min。離心管中即為所提取的樣品DNA/RNA,。
非洲豬瘟病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒【常見問題】
1. 純化柱堵塞
l 樣品用量太多:處理動物抗凝血液時,,樣品量控制在100-150µl。盡量使用無細胞的樣品,,如血漿,、血清、組織勻漿液的上清等,。
l 蛋白酶 K活性下降:重新制備蛋白酶 K,。使用后蛋白酶 K必須保存于-20℃,避免反復(fù)凍融,。蛋白酶 K與裂解液不能預(yù)先混合,。
l 樣品含固體顆粒:在第4步加入乙醇前,12,000rpm離心3min去除未消化的雜質(zhì),,轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管后再加入乙醇,。
l 樣品裂解不充分:樣品與裂解液混勻不充分。重新提取,,加入裂解液后先顛倒混勻3-5次,,然后以高速度渦旋讓樣品與裂解液充分混勻。
2. 下游應(yīng)用結(jié)果不理想
l 樣品被反復(fù)解凍: 避免反復(fù)凍溶樣品,。推薦使用新鮮樣品或只解凍過一次的樣品,。
l 蛋白酶K活性下降:更換蛋白酶K,。使用后蛋白酶 K必須立即保存于-20℃,,避免反復(fù)凍融。
l Nuclease Free Water被污染:更換新的Nuclease Free Water或DEPC處理水,。
l 乙醇殘留:柱子在洗脫前,,需要空甩去除乙醇,。對于敏感的應(yīng)用,柱子在洗脫后,,打開柱子的蓋子,,放置10-15min讓乙醇*揮發(fā)。
l 洗脫效率:處理富含DNA的樣品時,,把Nuclease Free Water預(yù)熱至55℃后再進行洗脫,,有利于提高DNA得率。
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