測(cè)定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測(cè)方法
說(shuō)起補(bǔ)鈣,,營(yíng)養(yǎng)專家認(rèn)為:生長(zhǎng)期,、孕期,、更年期、老年期要補(bǔ) ,,鈣的補(bǔ)充是一種常態(tài),,而且會(huì)貫穿人一生。每個(gè)人都需要補(bǔ)鈣,,但是大部分時(shí)候,,我們只需通過(guò)日常飲食就可以獲取所需的鈣元素。而那些真正需要額外補(bǔ)充鈣劑的,,多是處于青春期,、孕期、更年期,、老年期這些階段的人群,。
鈣能不能吸收和維生素D是否缺乏有關(guān)
我們補(bǔ)鈣的目的是為了骨骼的健康,從口服鈣到沉積在骨骼上的幾個(gè)環(huán)節(jié)都需要維生素D參加,。維生素D是骨骼健康的重要指標(biāo),,主要功能是維持人體內(nèi)鈣的代謝平衡以及骨骼形成。研究表明維生素D缺乏會(huì)引起一系列疾病,與人體免疫功能異常,、心血管疾病,、代謝性疾病、自身免疫性疾病,、腫瘤等密切相關(guān),。由于公眾增加關(guān)注維生素D缺乏對(duì)于身體健康的影響,在過(guò)去的幾年內(nèi),,樣品數(shù)量檢測(cè)大大增加,。
維生素D (Vitamin D) 是類固醇的衍生物,又可分為維生素D2(麥角鈣化醇)和維生素D3(膽鈣化醇),。維生素D2體內(nèi)無(wú)法產(chǎn)生,,來(lái)自于飲食攝取,多含于植物性食物中,,它是由植物的麥角固醇經(jīng)陽(yáng)光照射而合成的,。人體皮下儲(chǔ)存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇,受紫外線的照射后,,可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D3,,也可從強(qiáng)化奶或其他肉類食物中獲得。
所以臨床對(duì)25-羥維生素D的濃度監(jiān)測(cè)具有非常重要的意義,,評(píng)估維生素D營(yíng)養(yǎng)狀態(tài),,協(xié)助對(duì)高鈣血癥、骨質(zhì)疏松癥,、佝僂病、甲狀旁腺亢進(jìn)和25羥化缺陷等疾病的臨床診斷,,指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)心血管疾病,、自身免疫病、糖尿病和某些藥物的治療與補(bǔ)充,。
多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,,人體血中25-羥維生素D營(yíng)養(yǎng)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下:
目前常用的檢測(cè)25-羥維生素D含量的方法有競(jìng)爭(zhēng)性蛋白結(jié)合法(CPBA)、放射免疫法(RIA),、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)、液相色譜法(HPLC)等,。這些方法大部分耗時(shí),、步驟冗雜,無(wú)法滿足臨床簡(jiǎn)便,、高通量的要求,;并且血液中 維生素D濃度太低,檢測(cè)限達(dá)不到要求。
這次我們?nèi)耘f使用明星產(chǎn)品SOLA HRP對(duì)血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理,,使用Syncronis C18色譜柱保留分離VD,,建立了測(cè)定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測(cè)方法。
前處理步驟:
10mg 2mL SOLA HRP 96 孔板
(PN:60309-001)
活化
500℃甲醇,,500μL 含2% 甲酸的水
上樣
200μL 血漿
清洗
200μL 含水/ 甲醇(60:40)
洗脫
200μL 甲醇2 次
40℃氮?dú)獯蹈珊笥盟?
乙腈定容到100μL
LC方法:
色譜柱:
Syncronis C18 1.7μm 50×2.1 mm
(PN:97102-052130)
流動(dòng)相:
A: 水+0.1% 甲酸
B: 乙睛+0.1% 甲酸
梯度方法:
2min 內(nèi),,70-100%B
流速:0.8mL/min
柱溫:40℃
進(jìn)樣量:50μL
靈敏度:
LOQ 5ng/mL
線性范圍:
血漿中25- 羥基Vit D2 和25- 羥基Vit D3在5 -1000ng/mL 濃度范圍成線性,r2=0.9968 和0.9981
回收率結(jié)果:
血漿樣品添加25-OH Vit D2 和25-OH Vit D3 的回收率>94%,,RSD<4.0%,。
體內(nèi)維生素D濃度的準(zhǔn)確定量是診斷維生素D缺乏相關(guān)疾病診斷和治療反饋效果的重要指標(biāo)。采用SOLA HRP對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,,Syncronis C18液相色譜柱保留,,所得25-OH-VD2 和 25-OH-VD3的LOQ、標(biāo)準(zhǔn)曲線,、回收率均符合臨床檢測(cè)要求,,具有非常高的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性,,適用于血漿基質(zhì)中維生素D臨床樣本的快速檢測(cè),。
后小編啰嗦一句,體內(nèi)維生素D的水平,,決定每個(gè)人補(bǔ)充維生素D的利弊,。我們不推薦沒(méi)有任何理由地普遍補(bǔ)充維生素D。
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