戴安液相色譜柱在使用前,,進行柱的性能測試,,并將結(jié)果保存起來,,作為今后評價柱性能變化的參考,。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行,,只有這樣,,測得的結(jié)果才有可比性,。
戴安液相色譜柱適用范圍廣,,從極性化合物到非極性化合物都可獲得良好的分離,,在碳水化合物如低聚糖、苷類糖化學(xué),,生藥學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué),,生物物質(zhì)如多肽、蛋白,、核酸等多個領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,。
戴安液相色譜柱性能特點:
1、可使用100%水系流動相,,柱內(nèi)不會出現(xiàn)坍塌現(xiàn)象,。
2、適合于分離親水性化合物,。
3,、與常規(guī)ODS不同的選擇性,加強極性化合物的保留,,適合于分離純化肽類和生物分子,。
4、酸性環(huán)境下比普通ODS柱具有更長使用壽命,。
戴安液相色譜柱正確使用緩沖鹽:
緩沖鹽通常易溶于水,,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,,使填料板結(jié),柱壓上升,;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低,。緩沖鹽析出后,,去除非常困難,因此,,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要,。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗,。具體方法如下:
1,、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜,。
2,、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min,。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出,。
3,、緩沖鹽析出的補救方法:
方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
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