1,、 色譜柱的使用說明:
(1)、色譜柱使用前注意事項:色譜柱的儲存液無特殊說明,,均為評價報告所示的流動相,。在使用前,,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,,堵塞色譜柱,。
(2)、流動相:流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純,,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,,尤其是含鹽的流動相,。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換,。以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,,每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,,并*置換掉原來所使用的流動相。
(3),、樣品:樣品也要盡可能清潔,,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,,要使用保護(hù)柱,。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水,。
2,、 色譜柱的保存
(1)、反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動相,,實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘,。注意:不能用純水沖洗柱子,,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷,。
(2),、長期保存色譜柱:如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下,。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,,正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊dan化鈉 )中,,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上,。儲存的溫度是室溫。
3,、 色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品,,隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,會出現(xiàn)色譜峰高降低,,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,,一般來說可能是柱效下降。
(1),、反相柱的再生:依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),,乙腈,異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,,完成后再以相反順序沖洗色譜柱,。
(2),、正相柱的再生:依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇,、二氯甲烷,、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,然后再以相反的順序沖洗色譜柱,。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水,。
4、 色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高,,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,,屬于正常現(xiàn)象,。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),,可能的原因有如下幾點:
(1)、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染,;
(2),、色譜柱頭的填料被樣品污染;
(3),、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑,,形成結(jié)晶析出;
(4),、流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解,。
解決辦法如下:
(1)、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,,后再用純水超聲10分鐘,,重新裝入色譜柱。
(2),、如確定色譜柱頭的填料被污染,,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,,用相同的柱填料重新填入,,仔細(xì)修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲,。
(3),、如確定定是鹽結(jié)晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,,再換高濃度甲醇,。
(4)、如果因PH值使用不當(dāng),,很難恢復(fù),。
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