喆圖小編今天來說說酵母菌,,酵母菌是一些單細胞真菌,并非系統(tǒng)演化分類的單元,。酵母菌是人類文明史中被應用得早的微生物
大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細菌相似,,但比細菌菌落大而厚,菌落表面光滑,、濕潤,、粘稠,容易挑起,,菌落質(zhì)地均勻,,正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一,菌落多為乳白色,,少數(shù)為紅色,,個別為黑色。未發(fā)現(xiàn)其有性階段的酵母菌稱假酵母,。
大多數(shù)酵母菌為腐生,,其生活適pH為4.5-6,常見于含糖分較高的環(huán)境中,,例如果園土,、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生長迅速,,易于分離培養(yǎng),,在液體培養(yǎng)基中,酵母菌比霉菌生長得快,。
利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點,,常用酸性液體培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得酵母菌的培養(yǎng)液(這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細菌的生長),然后在固體培養(yǎng)基上劃線分離之,。
酵母菌細胞的死活可用美藍進行區(qū)別,。原因是美藍為弱氧化劑,無毒,,且還原后變?yōu)闊o色,。如果是活的酵母細胞,由于新陳代謝不斷進行,,細胞內(nèi)氧化還原電勢頗低,,還原力強,若有美藍染料進入活的酵母細胞內(nèi),,即被還原成無色,,而死的細胞或代謝緩慢的衰老,由于它們無還原能力或還原能力弱,,仍可被美藍染成藍色或淺藍色,。
將少量酵母菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中,,在適宜的條件下進行培養(yǎng),,定時測定培養(yǎng)液中的菌量,以菌量的對數(shù)作縱坐標,,生長時間作橫坐標,,繪制的曲線叫生長曲線,它反映了單細胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時所表現(xiàn)的群體生長規(guī)律,。依據(jù)其生長速率的不同,,一般可把生長曲線分為延緩期,、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期,。這四個時期的長短因菌種的遺傳性,、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線,,可了解各菌的生長規(guī)律,,對于科研和生產(chǎn)都具有很重要的指導意義。
實驗材料與培養(yǎng)基制備
1,,蘋果,、梨等、0.1%美藍染液,、1ml的吸管,、無菌培養(yǎng)皿、試管,、高壓鍋,、恒溫培振蕩養(yǎng)箱等。
2,,馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基),;
原料:馬鈴薯(80g)、葡萄糖(8g),、瓊脂(4g)、蒸餾水(400ml),。
配制方法:
(1) 先將馬鈴薯去皮,,切片,稱80克并加蒸餾水400ml,,煮沸半小時,, 用紗布過濾,補足蒸餾水量至400ml,,制成20%的馬鈴薯汁,。
(2) 在200ml20%的馬鈴薯汁中加入4g瓊脂,4g葡萄糖,,煮沸熔化,, 補足水分并在115℃條件下高壓滅菌20分鐘。制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板,。
3,,豆芽汁液體培養(yǎng)基:稱取黃豆芽50g,加水100ml,,煮沸1h,,過濾后 補足水分,,121℃濕熱滅菌后存放備用,此即為50%的豆芽汁,。取50%豆芽汁200ml,,葡萄糖50g,水800ml,,自然pH,,在115℃條件下高壓滅菌20min。
4,,YPD培養(yǎng)基:配方:1%酵母膏,,2%蛋白胨,2%葡萄糖,。 配制方法(1000ml配方):溶解10g酵母膏,,20g蛋白胨于900ml水中, 121℃20min高壓滅菌,。同時將20g葡萄糖加入100ml水中,,121℃20min高壓滅菌。然后在超凈臺中兩者混合,。
注:葡萄溶液和酵母膏,、蛋白胨溶液混合后在高溫下可能會發(fā)生化學反 應,導致培養(yǎng)成分變化,,所以要分別滅菌后在混合,,但要注意無菌操作。
實驗步驟
1,、接種:取一小塊果皮,,不需沖洗,直接接入豆芽汁液體培養(yǎng)基試管 中,,置28-30℃,,培養(yǎng)24h,可見培養(yǎng)液變渾濁,。
2,、培養(yǎng),用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.1ml,,注入另一管豆芽汁 液體培養(yǎng)基中,,置28-30℃再培養(yǎng)24h或稍長(過長則霉菌長出)。
3,、觀察:用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.1%美藍染液中,, 混勻后加蓋玻片制成水浸片,先用低倍鏡后換用高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況,。 活酵母可使美藍還原,,從而使菌體不著色,,用此方法可判斷酵母菌的死 活。
4,、分離:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板,。用劃線法分離酵 母培養(yǎng)液,從而得到單個菌落,。
5,、生長曲線測定:挑取單個菌落接種于30mlYPD液體培養(yǎng)基中,30℃,、 180r/min恒溫振蕩培養(yǎng)24h,,取擴大培養(yǎng)的菌液的菌液按照1:100的接種量接種于3瓶50mlYPD培養(yǎng)液中,同樣條件下振蕩培養(yǎng),,并分別于培養(yǎng)后2,、4、6,、8,、10、12,、14,、16、18,、20,、22、24,、26,、28、30h取菌種培養(yǎng)懸液5ml,,以未接種的酵母YPD液體培養(yǎng)基校正7200型紫外可見分光光度計的零點,在波長600nm處比色測定菌液OD600值,。以各時間點菌液的吸光光度值(OD600)為縱坐標,,以培養(yǎng)時間為橫坐標,繪制出酵母工程的生長曲線,。
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