喆圖小編今天來說說酵母菌,酵母菌是一些單細(xì)胞真菌,并非系統(tǒng)演化分類的單元,。酵母菌是人類文明史中被應(yīng)用得早的微生物
大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似,,但比細(xì)菌菌落大而厚,菌落表面光滑,、濕潤(rùn),、粘稠,,容易挑起,,菌落質(zhì)地均勻,正反面和邊緣,、中央部位的顏色都很均一,,菌落多為乳白色,,少數(shù)為紅色,個(gè)別為黑色,。未發(fā)現(xiàn)其有性階段的酵母菌稱假酵母。
大多數(shù)酵母菌為腐生,,其生活適pH為4.5-6,,常見于含糖分較高的環(huán)境中,例如果園土,、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生長(zhǎng)迅速,,易于分離培養(yǎng),,在液體培養(yǎng)基中,酵母菌比霉菌生長(zhǎng)得快,。
利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點(diǎn),,常用酸性液體培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得酵母菌的培養(yǎng)液(這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)),然后在固體培養(yǎng)基上劃線分離之,。
酵母菌細(xì)胞的死活可用美藍(lán)進(jìn)行區(qū)別,。原因是美藍(lán)為弱氧化劑,無毒,,且還原后變?yōu)闊o色,。如果是活的酵母細(xì)胞,由于新陳代謝不斷進(jìn)行,,細(xì)胞內(nèi)氧化還原電勢(shì)頗低,,還原力強(qiáng),,若有美藍(lán)染料進(jìn)入活的酵母細(xì)胞內(nèi),即被還原成無色,,而死的細(xì)胞或代謝緩慢的衰老,,由于它們無還原能力或還原能力弱,仍可被美藍(lán)染成藍(lán)色或淺藍(lán)色,。
將少量酵母菌接種到一定體積的,、適合的新鮮培養(yǎng)基中,在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng),,定時(shí)測(cè)定培養(yǎng)液中的菌量,以菌量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo),,生長(zhǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo),,繪制的曲線叫生長(zhǎng)曲線,它反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)的群體生長(zhǎng)規(guī)律,。依據(jù)其生長(zhǎng)速率的不同,,一般可把生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期,、穩(wěn)定期和衰亡期,。這四個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變,。因此通過測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線,,可了解各菌的生長(zhǎng)規(guī)律,對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有很重要的指導(dǎo)意義,。
實(shí)驗(yàn)材料與培養(yǎng)基制備
1,,蘋果、梨等,、0.1%美藍(lán)染液,、1ml的吸管、無菌培養(yǎng)皿,、試管,、高壓鍋、恒溫培振蕩養(yǎng)箱等,。
2,,馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基);
原料:馬鈴薯(80g),、葡萄糖(8g),、瓊脂(4g)、蒸餾水(400ml),。
配制方法:
(1) 先將馬鈴薯去皮,,切片,,稱80克并加蒸餾水400ml,煮沸半小時(shí),, 用紗布過濾,,補(bǔ)足蒸餾水量至400ml,制成20%的馬鈴薯汁,。
(2) 在200ml20%的馬鈴薯汁中加入4g瓊脂,4g葡萄糖,,煮沸熔化,, 補(bǔ)足水分并在115℃條件下高壓滅菌20分鐘。制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板,。
3,,豆芽汁液體培養(yǎng)基:稱取黃豆芽50g,加水100ml,,煮沸1h,,過濾后 補(bǔ)足水分,121℃濕熱滅菌后存放備用,,此即為50%的豆芽汁,。取50%豆芽汁200ml,葡萄糖50g,,水800ml,,自然pH,在115℃條件下高壓滅菌20min,。
4,,YPD培養(yǎng)基:配方:1%酵母膏,2%蛋白胨,,2%葡萄糖,。 配制方法(1000ml配方):溶解10g酵母膏,20g蛋白胨于900ml水中,, 121℃20min高壓滅菌,。同時(shí)將20g葡萄糖加入100ml水中,121℃20min高壓滅菌,。然后在超凈臺(tái)中兩者混合,。
注:葡萄溶液和酵母膏、蛋白胨溶液混合后在高溫下可能會(huì)發(fā)生化學(xué)反 應(yīng),,導(dǎo)致培養(yǎng)成分變化,,所以要分別滅菌后在混合,但要注意無菌操作,。
實(shí)驗(yàn)步驟
1,、接種:取一小塊果皮,,不需沖洗,直接接入豆芽汁液體培養(yǎng)基試管 中,,置28-30℃,,培養(yǎng)24h,可見培養(yǎng)液變渾濁,。
2,、培養(yǎng),用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.1ml,,注入另一管豆芽汁 液體培養(yǎng)基中,,置28-30℃再培養(yǎng)24h或稍長(zhǎng)(過長(zhǎng)則霉菌長(zhǎng)出)。
3,、觀察:用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.1%美藍(lán)染液中,, 混勻后加蓋玻片制成水浸片,先用低倍鏡后換用高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況,。 活酵母可使美藍(lán)還原,,從而使菌體不著色,用此方法可判斷酵母菌的死 活,。
4,、分離:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板。用劃線法分離酵 母培養(yǎng)液,,從而得到單個(gè)菌落,。
5、生長(zhǎng)曲線測(cè)定:挑取單個(gè)菌落接種于30mlYPD液體培養(yǎng)基中,,30℃,、 180r/min恒溫振蕩培養(yǎng)24h,取擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液的菌液按照1:100的接種量接種于3瓶50mlYPD培養(yǎng)液中,,同樣條件下振蕩培養(yǎng),,并分別于培養(yǎng)后2、4,、6,、8、10,、12,、14、16,、18,、20、22,、24,、26,、28、30h取菌種培養(yǎng)懸液5ml,,以未接種的酵母YPD液體培養(yǎng)基校正7200型紫外可見分光光度計(jì)的零點(diǎn),,在波長(zhǎng)600nm處比色測(cè)定菌液OD600值。以各時(shí)間點(diǎn)菌液的吸光光度值(OD600)為縱坐標(biāo),,以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),,繪制出酵母工程的生長(zhǎng)曲線。
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