誘導(dǎo)動物細胞融合的方法 |
在體外培養(yǎng)條件下,,動物細胞會自發(fā)融合,,但是頻率極低。因此,,一般都需要添加具有誘導(dǎo)細胞融合效應(yīng)的生物或化學(xué)藥劑,,或者采用電融合技術(shù),,人為地促進細胞融合。 病毒誘導(dǎo)融合 病毒是zui早采用的融合劑,。常用于誘導(dǎo)動物細胞融合的病毒有仙臺病毒,、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,,其中仙臺病毒zui常用,。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性,。 用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細胞融合的 優(yōu)點:融合率較高,,對各種動物細胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,,容易培養(yǎng),; 缺點:仙臺病毒不穩(wěn)定,在保存過程中融合活性會降低,,并且制備過程比較煩瑣,。此外,病毒引進細胞后,,可能會對細胞的生命活動產(chǎn)生干擾,。 聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合 聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,能夠有效地促進植物原生質(zhì)體和動物細胞的融合,。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇,,就會發(fā)生細胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,,就會發(fā)生細胞融合,。聚乙二醇誘導(dǎo)細胞融合的機理,目前還不太清楚,。聚乙二醇是化學(xué)試劑,,使用起來很方便,誘導(dǎo)細胞融合的頻率比較高,,但是它有一定毒性,,對有些細胞(如卵細胞)不適用。 電融合 20世紀80年代建立起來的電融合技術(shù),,是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中,,使細胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,,以促使細胞融合,。緊密排列的細胞,在相互接觸的細胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū),當(dāng)受到電擊時,,這個區(qū)域就會被擊穿,,產(chǎn)生脂雙層膜孔,導(dǎo)致細胞之間的細胞質(zhì)連通,,進而發(fā)生細胞融合,。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點,如誘導(dǎo)細胞融合的頻率高,,對細胞無毒害作用,,操作簡便,可重復(fù)性好,。
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