精制抗體的方法很多,。一般采用綜合技術(shù),，避免蛋白變性。如分離IgG時,，多結(jié)合使用鹽析法與離子交換法，以求純化,。提取IgM的方法也很多,，如應(yīng)用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等,。

一,、原理

蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度是由蛋白質(zhì)周圍親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的,。當(dāng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液,，中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失,。同時，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后,，由于離子強度發(fā)生改變,，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白溶解度降低,，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀,。

1、試劑

（1）正常人混合血清,；滅菌生理鹽水,。

（2）飽和硫酸銨溶液的配制

稱（NH4）₂SO₄（AR）400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解,，攪拌20分鐘,，趁熱過濾。冷卻后以濃氨水（15N　NH₄OH）調(diào)PH至7.4,。配制好的飽和硫酸銨,，瓶底應(yīng)有結(jié)晶析出。

（3）萘氏試劑配制

稱HgI 11.5克,，KI8克,，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后,，再加入20%NaOH 50ml,。

（4）0.02M，PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液（Phosphate Buffered Saline PBS）配制：

貯存液

A液：0.2M Na₂HPO₄：Na₂HPO₄·12H₂O 71.64克,，加蒸餾水至1000ml,；

B液： 0.2M NaH₂P₄：NaH₂P₄·2H₂O 3.12克，加蒸餾水至1000ml,；

應(yīng)用液：取A液81ml加B液19ml混合,，再以生理鹽水作10倍稀釋即成,。

（5）0.1M，PH7.4磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer P配制

將上述A液取81ml與B液19ml混合,，再以蒸餾水對倍稀釋即成,。

（6）20%磺基水楊酸。

2,、器材

普通冰箱,、離心機、電磁攪拌器,，751桮型紫外分光光度計,、扭力天平，粗天平,。透析袋,、尼龍繩、細(xì)竹棒,、精密PH試紙（PH5.5～9.0）,、眼科鑷子、小剪刀,。燒杯,、量筒、吸管,、滴管,、滅菌小瓶、試管等,。

3,、實驗操作

取1X ml血清加1X ml生理鹽水，于攪拌下逐滴加入2X ml飽和硫酸銨,，硫酸銨的終飽和度為50%,。

↓4℃，3h以上,，使其充分沉淀　　

離心（3000rpm）,，20min，充上清,，以x ml生理鹽水溶解沉淀,，再逐滴加飽和硫酸銨x/2ml。

↓置4℃3h以上,，[此時,，（nh4）2so4的飽和度為33%]

重復(fù)上述第二步過程1～2次。末次離心后所得沉淀物為γ-球蛋白,，以0.02% mol/l pH7.4pbs溶解至x ml裝入透析袋,。

↓對PBS充分透析,、換液3次，至萘氏試劑測透析外液無黃色,，即無NH4+為止,。

取透析袋內(nèi)樣品少許作適當(dāng)倍數(shù)稀釋后，以752型紫外分光光度計測定蛋白含量,。

4,、影響鹽析的因素

影響鹽析的因素很多，如蛋白質(zhì)的濃度,，鹽的濃度,，飽和度和pH，溫度等都可影響鹽析的結(jié)果,，操作時要充分注意,。

（1）蛋白質(zhì)的濃度

鹽析時，溶液中蛋白質(zhì)的濃度對沉淀有雙重影響,，既可影響蛋白質(zhì)沉淀極限,，又可影響蛋白質(zhì)的共沉作用。蛋白質(zhì)濃度愈高,，所需鹽的飽和度極限愈低，但雜蛋白的共沉作用也隨之增加,，從而影響蛋白質(zhì)的純化,。故常將血清以生理鹽水作對倍稀釋后再鹽析。

（2）離子強度

各種蛋白質(zhì)的沉淀要求不同的離子強度,。例如當(dāng)硫酸銨飽和度不同,，析出的成分就不同，飽和度為50％時,，少量白蛋白及大多數(shù)擬球蛋白析出,；飽和度為33％時γ球蛋白析出。

（3）鹽的性質(zhì)

有效的鹽是多電荷陰離子,。

（4）PH值

一般說來,，蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多，它的溶解度越大,。改變PH改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì),，也就改變了蛋白質(zhì)的溶解度。

（5）溫度

鹽析時溫度要求并不嚴(yán)格,，一般可在室溫下操作,。血清蛋白于25℃時較0℃更易析出。但對溫度敏感的蛋白質(zhì),，則應(yīng)于低溫下鹽析,。

（6）蛋白質(zhì)沉淀后宜在4℃放3小時以上或過夜,，以形成較大沉淀而易于分離。