使用前如何清洗凱氏定氮儀
凱氏定氮儀是利用凱氏定氮法對物質(zhì)中蛋白質(zhì)含量進行測定的儀器。凱氏定氮儀按其配置分,,可以分為全自動凱氏定氮儀和半自動定氮儀,。其中全自動凱氏定氮儀包括消化爐和凱氏蒸餾裝置。凱氏定氮儀操作時可以分為人工模式和自動模式,,不同的實驗者,,可以根據(jù)對實驗操作的熟練程度,自由選擇哪種方式,。一般的,,新手我們推薦使用自動模式,可以為你省去很多的步驟,。目前,,凱氏定氮儀已經(jīng)廣泛使用于測定乳核乳制品中蛋白質(zhì)的測定。
下面我們主要介紹下,,我們在使用全自動凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量時,,如何清洗定氮儀。
儀器安裝前,,凱氏定氮儀各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈,,所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中,,煮約10min,,水洗、水煮10min,,再水洗數(shù)次,,然后安裝并固定在一只鐵架臺上。儀器使用前,,微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌,,以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,正在使用的儀器,,每次測樣前,,蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器,重復(fù)蒸氣洗滌,,不得少于三次,,并檢查儀器是否正常。仔細(xì)檢查各個連接處,,保證不漏氣,。這樣,一方面保證了儀器的清潔,,另一方面,,也同時對儀器進行了檢查,一些壞的零部件,,可以及時被查出并替換,。
儀器安裝完后,我們需具體對儀器的內(nèi)部進行清潔,。
1.首先在凱氏定氮儀蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水,,加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性,以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果,,并放入少許沸石(或毛細(xì)管等),,以防爆沸。這個步驟有點類似于凱氏定氮法的消化前步驟,,用相應(yīng)的試劑對其進行清洗,。
2.沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應(yīng)室,但玻杯內(nèi)的水不要放光,,塞上棒狀玻塞,,保持水封,防止漏氣,。這一步可直接驗證插管是否可以使用。
3.蒸氣發(fā)生后,,立即關(guān)閉廢液排放管上的開關(guān),,使蒸氣只能進入反應(yīng)室,導(dǎo)致反應(yīng)室內(nèi)的水迅速沸騰,,蒸出蒸氣由反應(yīng)室上端口通過定氮球進入冷凝管冷卻,,在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水。
4.從定氮球發(fā)燙開始計時,,連續(xù)蒸煮5min,,然后移開煤氣燈。沖洗完畢,,夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,,由于氣體冷卻壓力降低,反應(yīng)室內(nèi)廢液自動抽到反應(yīng)室外殼中,打開廢液排出口夾子放出廢液,。
5.整個清洗過程,,到這里就結(jié)束了,經(jīng)過清洗這個過程,,儀器內(nèi)部環(huán)境已經(jīng)符合我們測定蛋白質(zhì)含量的需求,,另外,儀器的各部件也得到了檢驗,,可以及時更換漏氣或者其他壞了的部分,。
根據(jù)以上步驟重復(fù)清洗2~3次,再在冷凝管下?lián)Q放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口*浸沒在溶液中,,蒸餾1~2min,,觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色。如不變色,,表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈,。移去錐形瓶,再蒸餾1~2min,,用蒸餾水沖洗冷凝器下口,,關(guān)閉煤氣燈,儀器即可供測樣品使用,。
這樣,,凱氏定氮儀整個清洗過程就結(jié)束了。凱氏定氮儀在測定蛋白質(zhì)含量前,,一般都需要經(jīng)過清洗,,這樣對于測定結(jié)果,會更加,。另外,,也可以保證實驗室人員的安全,因為在清洗過程中,,對儀器進行了檢查,,排除了因為儀器的故障而造成了危險。
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