色譜柱峰形發(fā)生改變,、色譜峰分叉,、出現(xiàn)肩峰、保留時(shí)間漂移,、分離度變化或背壓升高,，都表明色譜柱被污染了,。用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗以去除非極性污染物,，謹(jǐn)慎操作以避免任何緩沖鹽的析出。如果沖洗不能解決問(wèn)題,，可采用以下步驟對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗和再生,。
■ 使用與樣品性質(zhì)和固定相類(lèi)型(反相、正相或HILIC)相匹配的常規(guī)清洗方法,，這有助于溶解可疑污染物,。
■ 在柱溫45 °C條件下，使用20倍柱體積的溶劑沖洗色譜柱,。
■ 如果使用的是反相色譜柱,，依次以非極性逐漸增強(qiáng)的溶劑(如，水到甲醇到四氫呋喃*到二氯甲烷*)沖洗色譜柱,。如果使用的是HILIC色譜柱,，依次以極性逐漸增強(qiáng)的有機(jī)溶劑(如，乙腈到乙腈/甲醇到乙腈/水到水)沖洗色譜柱,。
*注意：對(duì)于某些有機(jī)溶劑,，需要注意其與系統(tǒng)管路與真空脫氣包的兼容性。
■ 通過(guò)逆向沖洗程序,，再返回初始流動(dòng)相條件,。
如果確認(rèn)樣品或流動(dòng)相存在污染跡象,，或是分析條件或樣品項(xiàng)目對(duì)色譜柱的損害不可避免，更好的色譜柱使用與維護(hù)方式包括如下：
■ 參考“流動(dòng)相及樣品的制備及建議”部分
■ 增加清洗頻率,，包括：在每個(gè)分析梯度末端增加“清洗步驟”,，或是，一定的進(jìn)樣針數(shù)后進(jìn)行較為*的清洗
■ 使用保護(hù)柱,，專(zhuān)柱,，并定期更換(當(dāng)柱壓增加10%，或柱效下降10%時(shí))反相與HILIC色譜柱的保存
如需將色譜柱放置超過(guò)四天,，應(yīng)將其保存于100%乙腈中,。對(duì)于高溫條件下的分離，應(yīng)在使用后立即保存于100%乙腈中,，切勿將色譜柱保存于緩沖液中,。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則先用10倍柱體積95%純水沖洗色譜柱用以*清除柱內(nèi)的鹽成分,，再用10倍柱體積的乙腈沖洗柱,。將色譜柱*密封，防止溶劑蒸發(fā)而導(dǎo)致柱床變干,。