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大鼠超氧化物歧化酶操作步驟

來源:南京賽泓瑞生物科技有限公司   2011年03月24日 18:31  

大鼠超氧化物歧化酶操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

80U/mL

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40U/mL

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20 U/mL

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10 U/mL

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5 U/mL

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5,。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

1.準備試劑,,樣品和標準品,;

2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應(yīng)30分鐘,;

3.洗板5次,,加入酶標試劑,37℃反應(yīng)30分鐘,;

4.洗板5次,,加入顯色液A、B,,37℃反應(yīng)10分鐘,;

5.加入終止液;

6.15分鐘之內(nèi)度OD值,;

7.計算,。

南京賽泓瑞生物提供相應(yīng)支持。http://sorrent.com.cn/st179884

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