氮磷鈣測定儀操作說明書

 NPCa-02型氮磷鈣測定儀是在KDN型定氮儀的基礎上，改進設計,，研制而成的。

氮磷鈣消化裝置在150℃--500℃范圍內任意調節(jié)，同時只要將催化劑硫酸銅和硫酸鉀換成雙氧水,。將消化液定容后分別可測定粗蛋白、磷和鈣的含量,。這種催化劑既有較快的消化速度,，在消化液中又不留干擾物質影響粗蛋白、磷,、鈣的測定儀。在測定鈣時用乙二胺四乙酸二鈉鹽法,，即EDTA法（GB6436-86）,，從而巧妙地實現了一次消化,，連續(xù)測定的實用性,，可謂一舉多得,。其測定結果與原國家標準相符,，經有關專家鑒定,，認為該儀器不僅測定速度快,，操作簡便，重現性好,，度高,，而且可提高工作效率2-3倍,，節(jié)電60-70%左右,，節(jié)約試劑20%左右,。對改善分析人員工作環(huán)境,，減輕勞動強度都有積極作用,，是各飼料廠用作日常檢測的理想設備,。

• 工作原理：

H₂SO₄和H₂O₂都是強氧化劑，在高溫下放出新生態(tài)氧（O）,，使樣品中有機物分解,，放出CO₂、SO₂,、NH₃及各種元素,，其中CO₂、SO₂釋放到空氣中,，NH₃與H₂SO₄結合成（NH₄）₂,，SO₄、P,、Ca等各種無機離子均能固定在消化液中,。

粗蛋白質測定是硫酸氨在強堿條件下蒸餾，使氨逸出用硼酸吸收后用標準酸滴定測定氮的含量,，乘以換算系數為粗蛋白含量,；

磷的測定是磷在酸的條件下,，與礬鉬酸銨作用，形成黃色礬酸絡合物,，在420nm波長下比色其含磷量與吸光度成正比,；

鈣的測定是EDTA返滴定法，在待測液中先加入已知量的EDTA標準液,，然后調節(jié)PH值為12-14,，以鉻蘭黑R（鈣試劑）為指示劑，并用標準鈣溶液返滴定過量的EDTA,，終點由蘭色變成灰紅色,，由此計算鈣含量。

• 技術指標：
  • 測定范圍：適用于糧食,、食品,、飼料、乳制品及其他農副產品中,，粗蛋白,、磷、鈣含量的測定,。
  • 測定樣品：消化樣品一次同時可消化4個,。
  • 重現性，平行試驗結果：蛋白質符合GB9511-85,、GB632-85規(guī)定范圍之內,，磷符合GB6437-86規(guī)定范圍之內。鈣符合GB6432-86規(guī)定范圍之內,。
  • 電源：220V 50Hz
  • 額定功率：消化裝置：1200KW
• 操作說明：
  • 儀器和用具
  • NPCa-02型氮磷鈣測定儀
  • 分析天平：感量0.0001g
  • 實驗用粉碎機和研缽
  • 分樣篩：孔徑0.45mm（40目）
  • 酸式滴定管：25ml或50ml
  • 錐形瓶：200ml
  • 定容瓶：100ml和1000ml
  • 刻度移液器：10ml
  • 分光光度計：10mm比色池,，可在420nm下測吸光度
  • 容量瓶或具比色管50ml
  • 試劑

2.1 雙氧水：分析純30%

2.2 氫氧化鈉：化學純40%溶液

2.3 硼酸：分析純2%水溶液

2.4 混合指示劑：0.1%甲基紅、0.5%溴甲酚綠乙醇溶液,，二種溶液等體積混合,，用棕色瓶貯存于陰涼處。

2.5 鹽酸：分析純0.05mol/L鹽酸標準溶液,，4.2ml分析純濃鹽酸注入1000ml蒸餾水中,，用碳酸鈉法標定。

0.1mol/L鹽酸標準溶液,，8.3ml分析純濃鹽酸注入100ml蒸餾水中,，用碳酸鈉法標定。

2.6 濃硫酸：（GB625-77）含量98%無氮

2.7 釩鉬酸銨顯示劑：

稱取偏釩酸銨（NH₄VO₃）（HG₃--942）分析純1.25g加硝酸化學純250ml,，另取鉬酸銨分析純25g加蒸餾水400ml溶解,，在冷卻的條件下，將此溶液倒入上溶液,，加蒸餾水定容至1000ml避光保存,，如生成沉淀則不能使用,。

2.8 標準磷溶液：

將磷酸二氫鉀KH₂PO₄（GB1274）分析純在105℃干燥2h，在干燥器中冷卻后,，稱取0.2195g,，在1000ml容量瓶中，溶于蒸餾水中加硝酸化學純3ml,，用蒸餾水定容至刻度，配成50ug/ml的標準磷溶液,。

2.9 氫氧化鈉（GB629）分析純配成21%水溶液,。

2.10 三乙醇胺：分析純1:1水溶液。

2.11 乙二胺四乙酸二鈉（EDTA二鈉）（GB401）分析純3.7g加蒸餾水溶成1000ml溶液,，濃度0.01M,。

2.12 鈣指示劑：1g鉻蘭黑R與100gK₂SO₄研細混勻，貯于棕色瓶內,。

2.13 鈣標準溶液：

碳酸鈣（分析純）在105℃干燥4-6h,，在干燥器內冷卻后稱取0.5g，溶于25ml0.5mol/L鹽酸中煮沸溶解,，除去CO₂定容至500ml,。該溶液含鈣量為0.4mg/mL，即0.01M濃度,。鈣克分子濃度M,。可用下式計算：

M = G×0.4/(m * v)

式中：G---稱樣重（g）,；

      m---鈣分子量,；

      V---體積（升）。

• 樣品制備

取有代表性的樣品,，粉碎至40目篩通過,，用四分法縮至200g，裝于密封容器中備用

• 操作步驟

4.1 消化

4.1.1 消化前的準備

將抽氣泵的外螺紋,，同水咀的內螺紋固定牢,，在排氣管的尾端裝上膠管，膠管的另一頭裝在抽氣泵的橫出口處,，再在抽氣泵的下端裝上膠管,，接通下水道開足水咀（注：出水膠管長度不得超出30cm，并不準彎曲）,，使抽氣泵有足夠的吸力,。

4.1.2 消化操作

• 稱取0.2-1g試樣（含氮量0.1-160mg以含量定）準確至0.0001g干凈無損失地轉入清洗干凈的100ml定容消化管中，加濃硫酸10ml搖勻,。
• 將裝有試樣的定容消化管移在消化管架上,，套在裝有密封圈的排氣管上將消化管上將消化管稍加旋轉,，使連接處保持密封良好，再裝上彈簧夾,。
• 手握排氣管,，連同裝有試樣的消化管一起移至消化爐上，使消化管在電爐中心位置,，消化管底離電爐底10mm左右,，接通電源根據需要開啟開關將電壓調至（220V或450℃）消煮20min左右，見H₂SO₄大量冒煙消化液呈醬油色,，此時帶上手套,，將排氣管連同消化管一起取出，置于消化管架上,，稍加冷卻,，打開排氣管上部瓶塞，逐個向消化管內加入雙氧水2-3ml（加雙氧水時用吸管逐滴加入,，切忌在電爐上加雙氧水,，以防消化管破裂）后，將電壓調至（120-150V或300℃）,，重新轉入消化爐煮5min,，仍用上法，向消化管內滴入雙氧水直至消化液清澈透明,，再移入消化爐,，繼續(xù)消煮15min（此時電壓調回220V或450℃）取出，待消化液冷卻至室溫（冷卻時排氣管繼續(xù)保持吸氣狀態(tài),，切忌放在冷水中冷卻）再在消化管內加入蒸餾水至刻度（100ml）,，搖勻、待測,。

4.2 粗蛋白測定（半微量蒸餾法）

4.3 在定容待測的消化液中,，用移液管移出定量的消化液于干凈的消化管內，蒸餾參照蛋白質測定儀（定氮儀）步驟操作,。

4.4 滴定

吸收氮后的吸收液,，用標定后的鹽酸溶液進行滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛易仙珵榻K點,。

4.5 空白測定

用0.1g糖代樣品或不加樣品做空白測定,。

4.6測定結果計算

5 磷的測定

5.1 標準曲線繪制

準確吸取磷標準溶液（52ug/ml）0、1.0,、2.0,、3.0、4.0、5.0,、6.0,、8.0、10.0,、12.0,、15.0于50ml容量瓶中各加入釩鉬銨顯示劑10ml，用蒸餾水稀釋至刻度搖勻,，放置10min以上,，以0ml溶液為參比，用10mm比色皿,，在420nm波長測各溶液的吸光度用磷含量為橫坐標,，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線,。

5.2 試樣測定

準確吸取待測消化液2-10ml（視樣品含磷量定，使光密度值不超過標準曲線范圍）于50ml容量瓶中,，以空白消化液作參比按繪制曲線同樣步驟顯色,、比色，測得樣品吸光度,，由標準曲線查得樣品含磷量,。

5.3測定結果計算

6．鈣的測定（EDTA）返滴定法

6.1 準確吸取待測消化液10ml于50ml錐形瓶，加蒸餾水40ml,，三乙醇銨2ml,，20%氫氧化鈉7.2ml，邊加邊搖中和試樣分解液的酸度,，再加20%氫氧化鈉2ml,，使溶液的PH值達12-14，加鈣指示劑0.1g左右,，加入0.01MEDTA液10ml,，此時溶液應呈藍綠色（如是紅色，說明分解液中鈣的含量高,，還要少吸取樣品）然后用0.01M標準鈣滴定過剩的EDTA,，終點由藍綠色變?yōu)樽霞t色，同時進行空白試樣的測定,。

6.2 結果計算