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本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷,。
犬孕激素/孕酮(PROG)定量檢測試劑盒(ELISA)
使用說明書
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒試劑盒名稱】
犬孕激素/孕酮(PROG)定量檢測試劑盒(ELISA)
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒試劑盒用途】
定量檢測血清,、血漿及相關(guān)液體。
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),。將標準品,、待測樣本加入到預(yù)先包被犬孕激素/孕酮(PROG)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結(jié)合的成分,,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B,,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中犬孕激素/孕酮(PROG)濃度呈正相關(guān),,450nm波長下測定OD值,,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中犬孕激素/孕酮(PROG)含量,。
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒試劑盒組成】
1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
2 | 標準品 | 0.3mL×6管 | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
4 | 樣本稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 特殊稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 酶標試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1,、
2、標準規(guī)格酶標儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5、一次性試管
6,、吸水紙
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒操作步驟】
1,、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL,;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加,。
4,、溫育:
5,、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,,空白對照孔不加,。
7,、溫育:
8,、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,,再加入顯色劑B液 50μL,,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),
10,、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11、測定:以空白孔調(diào)零,,在終止后15分鐘內(nèi),,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12,、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。
2,、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3,、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒,。
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒注意事項】
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2、酶標包被板開封后如未用完,,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,,取平均值,以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,超過此范圍,,為標準曲線延伸計算所得,,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(6.25-200ng/L范圍內(nèi)),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,,可適當延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,,標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復(fù)使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,,不同批號的試劑不得混用,。
9,、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒操作程序總結(jié)】
準備試劑,,樣品和標準品
計算
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒檢測范圍】
請
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格】
96人份/盒 48人份/盒
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒貯藏】
2
【犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒有效期】
6個月
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