ELISA實驗看似簡單,,其實不然,。記得以前一個同學*次做ELISA實驗,跟我說,,ELISA實驗簡直太簡單了,,到第2次在次做ELISA實驗的時候,他驚訝了,,說結果差別怎么這么大(同一份標本),,第三次的時候,他決定認真的做一次,,爭取做到同一份標本,,這次讓他感受到ELISA并不是那么簡單,發(fā)覺其實挺難的,。今天的文章中為大家講述一些ELISA實驗中的小技巧,,希望對大家有所幫助!
1.操作前應對實驗的物理參數(shù)有充分的了解,,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃),、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等,,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求,。
2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,,血清殘留在反應孔壁上,,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,,加樣次序要與說明書一致,,否則可導致結果錯誤,實驗重復性差,。
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應孑L內(nèi)滯留的時間不宜太長,。不要使洗液在孑L間竄流,,造成孔問污染,導致假陰性或假陽性,。
4.要保證加液量一致ELISA試劑盒我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,,滴瓶不易控制加液量不準,造成顯色不統(tǒng)一,,判斷錯誤,。
5.顯色液量不可過多加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應,顯色液量不能過多,,以免顯色過強,。
ELISA試劑盒的影響因素應選用質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品,不能圖便宜,,忽視質(zhì)量保證,。試劑應妥善保存于4℃冰箱內(nèi),在使用時先平衡至室溫,,不同批號的試劑組分不宜交叉使用,。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完,剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質(zhì),,顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,,導致錯誤結果。
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