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AB液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定果糖,、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的應用

來源:上海分析儀器銷售中心   2018年05月15日 10:31  

傳統(tǒng)檢測單糖,、雙糖的分析方法有化學法,、光譜法、GCMS,、HPLC等方法,。其中化學法無法準確測定單種糖的含量;光 譜法的工作繁瑣,、誤差比較大;GC-MS方法需要進行衍生化反 應,,前處理復雜,,不利于快速分析;HPLC法雖然相比其他方法靈 敏度好,、檢測速度快,、適用范圍廣,但也存在檢出限較低,、抗干 擾能力差,,尤其對于食品中低濃度的單糖、雙糖很難進行的 測定,,無法滿足現(xiàn)階段對食品檢測快速,、靈敏,、準確的要求。LCMS/MS技術(shù)通過質(zhì)譜的高選擇性和高靈敏度能夠降低目標物的檢 出限,、提高檢測的重現(xiàn)性,。

由于糖類為水溶性化合物,在常規(guī)的C18色譜柱上沒有保留,, 而采用其他填料的親水色譜柱也很難得到太好的峰形或分離度,。 因此,選取一款合適的分析糖的色譜柱是液質(zhì)分析糖的實驗關(guān)鍵 點,。目前專門測試糖的糖柱通常為液相柱,,需要用到100%純水 相來作為流動相,并且流速通常高于1 mL/min,,這樣的色譜條件 對于大多數(shù)的質(zhì)譜離子源來說都無法實現(xiàn)化合物的有效離子化,, 或者只有通過分流才能實現(xiàn),但是分流后將損失儀器的檢測靈敏 度,,失去了使用液質(zhì)聯(lián)用儀測試糖的提高靈敏度的目的,。

SCIEX 的 LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的一大特點就是強大的 TurboV™離子源技術(shù),離子源的加熱能夠達到750℃,,ESI源耐受流速 范圍 5 µL/min~3.0 mL/min,,APCI源耐受流速范圍50 µL/ min~3.0 mL/ min,因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液質(zhì)聯(lián)用儀上進行測試,, 即實現(xiàn)了好的分離效果,,又提高了檢測靈敏度。本實驗使用SCIEX Triple Quad™ 4500 質(zhì)譜系統(tǒng)同時測定梨中的葡萄糖,、果糖,、蔗糖 和山梨醇四種糖, 實驗方法簡單、靈敏度高,、選擇性好,。

實驗思路 1. 配制果糖、葡萄糖,、蔗糖和山梨醇標準曲線,,測試四種水溶性 糖的*低檢出限; 2. 測試碭山酥梨果實中四種水溶性糖的含量,,了解梨中四種糖的 比例關(guān)系,。

樣品處理 1.移取果糖、葡萄糖,、蔗糖和山梨醇標準品,,用純水稀釋,配制 成 50 ng/mL,、100 ng/mL,、500 ng/mL,、1 µg/mL、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的標準溶液,。 2.梨果實中可溶性糖的提取,。

梨果實中糖的提取

料:碭山酥梨(采集于南京農(nóng)業(yè)大學江浦園藝實驗站) 將樣品去皮削成小塊,液氮速凍后儲存于-80冰箱,。稱取2g樣 品,,加液氮研磨后,加入80%乙醇7 mL混勻,。在37℃水浴中恒溫 30 min,,超聲提取15 min,10000 r/min離心15 min,。將上清液移 入25 mL容量瓶,。重復提取3次,*后加入80%乙醇定容至25 mL,。 取2 mL溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),,用1 mL水溶解蒸干后的固體,溶解時用超 聲波處理,,盡量溶解*,。溶液離心后,用0.22 µm水系濾膜處 理,,即可用于測定,。 實驗過程中發(fā)現(xiàn)此前處理過程提取出的糖樣品在液質(zhì)儀器上 的響應信號過高,*終樣品又用純水稀釋10倍和1000倍分別上機 測試,。

色譜方法 色譜柱:Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm,; 流動相:100%純水洗脫 流速:1 mL/min; 柱溫:85℃,; 進樣量:10 µL
 

具體可以到資料下載中心下載,,謝謝。

 

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