傳統(tǒng)檢測(cè)單糖、雙糖的分析方法有化學(xué)法,、光譜法,、GCMS、HPLC等方法,。其中化學(xué)法無法準(zhǔn)確測(cè)定單種糖的含量,；光 譜法的工作繁瑣、誤差比較大,；GC-MS方法需要進(jìn)行衍生化反 應(yīng),，前處理復(fù)雜，不利于快速分析；HPLC法雖然相比其他方法靈 敏度好,、檢測(cè)速度快,、適用范圍廣，但也存在檢出限較低,、抗干 擾能力差,，尤其對(duì)于食品中低濃度的單糖、雙糖很難進(jìn)行的 測(cè)定,，無法滿足現(xiàn)階段對(duì)食品檢測(cè)快速,、靈敏,、準(zhǔn)確的要求,。LCMS/MS技術(shù)通過質(zhì)譜的高選擇性和高靈敏度能夠降低目標(biāo)物的檢 出限、提高檢測(cè)的重現(xiàn)性,。

由于糖類為水溶性化合物,，在常規(guī)的C18色譜柱上沒有保留， 而采用其他填料的親水色譜柱也很難得到太好的峰形或分離度,。 因此,，選取一款合適的分析糖的色譜柱是液質(zhì)分析糖的實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵 點(diǎn)。目前專門測(cè)試糖的糖柱通常為液相柱,，需要用到100%純水 相來作為流動(dòng)相,，并且流速通常高于1 mL/min，這樣的色譜條件 對(duì)于大多數(shù)的質(zhì)譜離子源來說都無法實(shí)現(xiàn)化合物的有效離子化,， 或者只有通過分流才能實(shí)現(xiàn),，但是分流后將損失儀器的檢測(cè)靈敏 度，失去了使用液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)試糖的提高靈敏度的目的,。

SCIEX 的 LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的一大特點(diǎn)就是強(qiáng)大的 TurboV™離子源技術(shù),，離子源的加熱能夠達(dá)到750℃，ESI源耐受流速 范圍 5 µL/min～3.0 mL/min,，APCI源耐受流速范圍50 µL/ min～3.0 mL/ min,，因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液質(zhì)聯(lián)用儀上進(jìn)行測(cè)試， 即實(shí)現(xiàn)了好的分離效果,，又提高了檢測(cè)靈敏度,。本實(shí)驗(yàn)使用SCIEX Triple Quad™ 4500 質(zhì)譜系統(tǒng)同時(shí)測(cè)定梨中的葡萄糖、果糖,、蔗糖 和山梨醇四種糖, 實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單,、靈敏度高、選擇性好,。

實(shí)驗(yàn)思路 1. 配制果糖,、葡萄糖、蔗糖和山梨醇標(biāo)準(zhǔn)曲線,，測(cè)試四種水溶性 糖的*低檢出限,； 2. 測(cè)試碭山酥梨果實(shí)中四種水溶性糖的含量,，了解梨中四種糖的 比例關(guān)系。

樣品處理 1．移取果糖,、葡萄糖,、蔗糖和山梨醇標(biāo)準(zhǔn)品，用純水稀釋,，配制 成 50 ng/mL,、100 ng/mL、500 ng/mL,、1 µg/mL,、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 2．梨果實(shí)中可溶性糖的提取,。

梨果實(shí)中糖的提取

材料：碭山酥梨（采集于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江浦園藝實(shí)驗(yàn)站） 將樣品去皮削成小塊,，液氮速凍后儲(chǔ)存于-80冰箱。稱取2g樣 品,，加液氮研磨后,，加入80%乙醇7 mL混勻。在37℃水浴中恒溫 30 min,，超聲提取15 min,，10000 r/min離心15 min。將上清液移 入25 mL容量瓶,。重復(fù)提取3次,，*后加入80%乙醇定容至25 mL。 取2 mL溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),，用1 mL水溶解蒸干后的固體,，溶解時(shí)用超 聲波處理，盡量溶解*,。溶液離心后,，用0.22 µm水系濾膜處 理，即可用于測(cè)定,。 實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)此前處理過程提取出的糖樣品在液質(zhì)儀器上 的響應(yīng)信號(hào)過高,，*終樣品又用純水稀釋10倍和1000倍分別上機(jī) 測(cè)試。

色譜方法 色譜柱：Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm,； 流動(dòng)相：100%純水洗脫 流速：1 mL/min,； 柱溫：85℃； 進(jìn)樣量：10 µL
 

具體可以到資料下載中心下載,，謝謝,。