ELISA試劑盒實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗,、二抗和底物，間中夾雜著

洗滌和封閉,。然而,，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好,，也有可能毀了整個實驗

,。在實驗結(jié)束時，我們是否能獲得有意義的信息,，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比,。背景

噪音會影響您對結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,，下面有一些tips,。

洗滌很重要

洗滌步驟看似很無聊，其實很重要,，因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)

殘留在微孔板中,，那么它會增加背景噪音。如有必要,，可增加洗滌液中的鹽濃度,，這會阻止非

特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,，而您懷疑洗滌不夠時,，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

封閉更關(guān)鍵

封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點,。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體

非特異結(jié)合的機(jī)會,。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,，懷疑封閉不

充分,，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時間。

如果您一直被背景問題所困擾,，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液,。這可能需要時間，但也

是值得的,。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑,。您使用的類型須取決于多

個因素，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原,、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特

異性結(jié)合,，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原,、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜,、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特

異結(jié)合上很有用,。但它們只在存在時起作用,，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添

加封閉液,。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),，它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性,。另一

個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

蛋白封閉液則有所不同,，是*的,。它們與開放位點結(jié)合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗

原分子,。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA),、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠,。血清組

分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用,。不過，它的缺點在于能與

Protein A和IgG抗體相互作用,。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清,。

抗體濃度須優(yōu)化

我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟，但是如果試劑稍有不同,，則可能需要優(yōu)化抗體

的量,。記住，非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點,，切勿使用過多的一抗或二抗,。

檢測試劑要適量

另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,，或者未正確稀釋,，則會導(dǎo)致

高背景。也不要顯色過度,，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液,。

    如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,，那么也無需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,，

并排除可能存在的問題,。悉心優(yōu)化，相信很快就會有漂亮的結(jié)果,。