ELISA試劑盒實驗的原理似乎很簡單,，不外乎固定抗原,，添加一抗、二抗和底物,，間中夾雜著

洗滌和封閉,。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉,，如果做得不太好,，也有可能毀了整個實驗

。在實驗結束時,，我們是否能獲得有意義的信息,，這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景

噪音會影響您對結果的判斷,。如何降低ELISA的背景,，下面有一些tips。

洗滌很重要

洗滌步驟看似很無聊,，其實很重要,，因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)

殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音,。如有必要,，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非

特異結合反應,。如果背景過高,，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù),。

封閉更關鍵

封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點,。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體

非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧,。如果您的背景過高,，懷疑封閉不

充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,，或適當延長封閉時間,。

如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液,。這可能需要時間,，但也

是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多

個因素,，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑,。好的封閉液應降低非特

異性結合,，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用,。

常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,，在去除洗滌過程中的一些非特

異結合上很有用,。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉,。因此所有洗滌液中也必須添

加封閉液,。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結合,，產(chǎn)生假陰性。另一

個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉,。

蛋白封閉液則有所不同，是*的,。它們與開放位點結合并封閉,，同時穩(wěn)定與微孔板結合的抗

原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA),、脫脂奶粉,、正常血清和魚明膠。血清組

分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用,。不過,，它的缺點在于能與

Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清,。

抗體濃度須優(yōu)化

我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體

的量,。記住,，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,，切勿使用過多的一抗或二抗,。

檢測試劑要適量

另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋,，則會導致

高背景,。也不要顯色過度，如有必要,，優(yōu)化一下何時應加入終止液,。

    如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔心,，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,，

并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,，相信很快就會有漂亮的結果,。