液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),,下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)?! ?br /> 1.進(jìn)樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,,進(jìn)樣量是恒定的。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的,?! ?br /> 2.輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4X107Pa,,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí),,可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),,可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對(duì)提高分辨率,、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀,,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,,包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度,、PH值,,或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離,?! ?br /> 3.分離系統(tǒng)該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長(zhǎng)度為10~50cm(需要兩根連用時(shí),,可在二者之間加一連接管),內(nèi)徑為2~5mm,,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,,住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去),、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn),,加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),,或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基,、羥甲基,、苯基、氨基或各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物,。因此,,這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,,就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來?! ×硗?,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài),,極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小,,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對(duì)縮小譜帶寬度,、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,,基質(zhì)粒度小,,塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,,會(huì)提高分辨率的道理,。再者,液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,,通過改善傳質(zhì)速度,,縮短分析時(shí)間,就可增加層析柱的效率,?! ?br /> 4.檢測(cè)系統(tǒng)液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種,?! ?br /> (1)紫外檢測(cè)器該檢測(cè)器適用于對(duì)紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測(cè)。其特點(diǎn):使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸,、氨基酸,、核苷酸、多肽,、激素等均可使用);靈敏度高(檢測(cè)下限為10-10g/ml);線性范圍寬;對(duì)溫度和流速變化不敏感;可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品?! ?br /> (2)示差折光檢測(cè)器凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分,,均可使用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。目前,,糖類化合物的檢測(cè)大多使用此檢測(cè)系統(tǒng),。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單,,但靈敏度低(檢測(cè)下限為10-7g/ml),,流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化,因此,,它既不適用于痕量分析,,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測(cè)?! ?br /> (3)熒光檢測(cè)器凡具有熒光的物質(zhì),,在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比,。因此,,這一檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸,、胺類,、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測(cè)定,其靈敏度很高(檢測(cè)下限為10-12~10-14g/ml),,痕量分析和梯度洗脫作品的檢測(cè)均可采用,。
5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集,、貯存,、顯示、打印和處理等操作,,使樣品的分離,、制備或鑒定工作能正確開展。
5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集,、貯存,、顯示、打印和處理等操作,,使樣品的分離,、制備或鑒定工作能正確開展。
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