色譜柱在使用前,，進行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣,，測得的結(jié)果才有可比性,。

1、樣品的前處理：

　　a,、使用流動相溶解樣品,。

　　b,、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

　　c,、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。

2、流動相的配制：

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點：

　　a,、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中),。

　　b,、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外),。

　　c,、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度),。

　　d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng),。如使用UV檢測器,，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e,、流動相沸點不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進行,。

　　f,、在流動相配制好后，一定要進行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3,、流動相流速的選擇：

　　因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效,，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml/min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳,。

　　當選用*流速時,，分析時間可能延長,。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,，可適當增加甲醇或乙腈的含量),。