薄層色譜法,,又簡(jiǎn)寫為TLC,,常用于中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別。由于該方法鑒別專屬性強(qiáng),,使用設(shè)備簡(jiǎn)單,,易于操作,故應(yīng)用廣泛,,在目前的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定性鑒別中(如中國藥典和食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)),,已大大地超過了顯微鑒別,、理化鑒別和光譜鑒別。
筆者在zui近的醫(yī)院制劑申報(bào)過程中,,對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定,,使用了大量的薄層譜法,積累了一定的工作經(jīng)驗(yàn),。下面,,對(duì)薄層色譜法在中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用,提出自己的一些思路,。
一,、醫(yī)院制劑由于其自身的特殊性,如只能在本院銷售,,生產(chǎn)和檢驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)陋,,生產(chǎn)量小,劑型和品種相對(duì)較多,,生產(chǎn)中常以水煎煮為主。故在選擇處方中的薄層定性藥材時(shí),,應(yīng)以選擇水溶性成分為先,。如芍藥苷、梔子苷,、黃芪甲苷,、龍膽苦苷、人參皂苷等苷類或綠原酸,、阿魏酸等易溶于水的有機(jī)酸類成分,。
二、仔細(xì)分析處方,。選擇方中薄層定性的藥材,,應(yīng)先選取以粉碎入藥的藥材。因?yàn)檫@部分藥材中的有效成分一般沒被破壞,,特別是一些含有揮發(fā)性成分的藥材,,如薄荷、香附,、荊芥等,,在薄層層析中以藥材作為對(duì)照品,很容易鑒別出來,。
三,、對(duì)處方中含有多糖類或淀粉質(zhì)較多的藥材,如麥冬,、北沙參,、黨參等,,可采取先酸解后用有機(jī)溶劑提取的方法。經(jīng)這樣處理后,,薄層層析斑點(diǎn)一般都比較清晰,,藥檢所復(fù)核時(shí)往往容易通過。
四,、在使用展開劑時(shí),,在同等條件下,應(yīng)選擇無毒或毒性較小的有機(jī)溶劑,。如選用環(huán)己烷而不選用正己烷,,選用甲苯而不選用苯。以減少有機(jī)溶劑毒性對(duì)人體的侵害,。
五,、對(duì)樣品的取樣量不宜太大。如果取樣量太大,,點(diǎn)樣時(shí)往往因樣品的濃度太高而造成點(diǎn)樣困難,,展開時(shí)斑點(diǎn)又不易分離而使薄層圖譜不清晰。
六,、對(duì)中藥復(fù)方制劑的液體劑型,,提取分離方法應(yīng)溶劑法,用適宜的有機(jī)溶劑提取,。如是提取水溶性成分,,應(yīng)考慮對(duì)樣品進(jìn)行脫脂處理。對(duì)酒劑,、酊劑或搽劑中含有的樣品,,應(yīng)先在水浴上蒸去后再作下一步的處理。如液體劑型不宜用有機(jī)溶劑提取,,也可采用先將藥液置水浴上蒸干(或加入適量硅藻土分散),,再用有機(jī)溶劑提取的方法。
七,、對(duì)中藥復(fù)方制劑的固體劑型,,提取分離方法可選用超聲提取法、回流提取法或溶劑提取法(應(yīng)先將樣品加定量水溶解)等,。超聲提取方法簡(jiǎn)單,,所需時(shí)間短,目前使用較多,,應(yīng),,但在使用過程中應(yīng)注意一個(gè)問題,如提取時(shí)使用的有機(jī)溶劑是,,超聲處理時(shí)間應(yīng)控制在10~20min以內(nèi),,超聲時(shí)容器不能密閉太緊,,以免瓶塞沖出或全部揮發(fā),特別是在氣溫較高的夏天,,尤其要注意,。
八、對(duì)中藥復(fù)方制劑的外用劑型,,如軟膏劑,、黑膏藥、貼膏一類,,在樣品處理時(shí),,應(yīng)首先考慮去掉賦形劑后再對(duì)樣品進(jìn)行處理。如用凡士林制成的軟膏,,可用有機(jī)溶劑除去凡士林,。
九、樣品經(jīng)薄層展開后,,觀察層析情況,,筆者認(rèn)為應(yīng)多選擇在日光下觀察為主。原因?yàn)榇蠖鄶?shù)醫(yī)院制劑室未建立暗室,,在紫外光燈下拍照有困難,。
十、對(duì)樣品中某些成分的提取分離,,可先采取相類似的方法,然后再選用不同的定容溶液和展開劑,,即可達(dá)到目的,。如同時(shí)提取某些皂苷類、苷類,、有機(jī)酸類等,。
十一、在中藥復(fù)方制劑中,,往往藥味較多,,化學(xué)成分較為復(fù)雜,給單一成分的分離造成一定困難,。為了達(dá)到分離的目的,,在具體操作中,可以考慮使用高速離心,,柱層析,、氧化鎂凈化、水或氨試液洗滌等多種操作方法,。但在使用這些方法時(shí),,必須注意不能把應(yīng)提取的有效成分棄掉了,。
十二、在用碘蒸氣或氨蒸氣對(duì)薄層板顯時(shí),,所加的量不宜過多,,使用的容器必須密閉,操作人不得離開,,必須等到薄層斑點(diǎn)顯度適宜時(shí),,才可取出。
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