分為以下兩種方法：

（一）酶標(biāo)抗體法 *直接法 *間接法  
（二）非標(biāo)記抗體酶法 *酶橋法 *PAP法  

（一）酶標(biāo)抗體法 

*通過共價鍵將酶結(jié)合在抗體上,，制成酶標(biāo)抗體,，與標(biāo)本進行反應(yīng)后,，再用酶組化法將酶顯色,，使之生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,，以供光鏡和電鏡觀察,。 -優(yōu)點：切片能長期保存,、反復(fù)觀察,，適于鏡下半定量分析,。 
-缺點：酶與抗體形成的共價鍵，可損害抗體和酶的活性,；易產(chǎn)生非特異染色,。  

(1) 酶標(biāo)抗體法——直接法 

將酶直接標(biāo)記在一抗上，然后直接與相應(yīng)抗原特異地結(jié)合,。形成抗原-抗體-酶復(fù)合物,，zui后用底物顯色劑顯色。  

(2) 酶標(biāo)抗體法——間接法

*將酶標(biāo)記在二抗上,，先將一抗與相應(yīng)的抗原結(jié)合,，形成抗原抗體復(fù)合物，再用二抗(酶標(biāo)抗體)與復(fù)合物中的特異抗體結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，zui后用底物顯色劑顯色。 (a) 酶標(biāo)抗體間接法的操作步驟 *標(biāo)本準(zhǔn)備： -石蠟脫蠟至水,； 

-冰凍切片浸入4°C丙酮固定10min,，0.01M PBST漂洗，5min×3,； 
-細胞爬片先用PBS洗,，然后4°C丙酮固定10min，再0.01M PBST漂洗,，5min×3,； *石蠟切片需要進行抗原修復(fù)，其它標(biāo)本則不用； 

*封閉內(nèi)源性過氧化物酶：3％H2O2-甲醇溶液室溫孵育5～10min (濕盒內(nèi)) ,； *0.01M PBST漂洗,，5min×3； 

*5～10%正常山羊血清(0.01M PBS稀釋)封閉,，室溫孵育30min (濕盒內(nèi)) ,； 

*傾去血清勿洗，加1％BSA(PBST配制)稀釋的一抗,， 37°C孵育60min 或4°C過夜(濕盒內(nèi))； 

*0.01M PBST 漂洗,，5min×3,； 

*加HRP 標(biāo)記的二抗室溫孵育lh或37°C 30min ； *加0.01％H2O2~0.05％DAB顯色 (顯色液應(yīng)新鮮配置),； 

*經(jīng)PBS漂洗3次后,，梯度酒精脫水，二甲苯透明,，明膠甘油封片,，顯微鏡觀察。  

（二）非標(biāo)記抗體酶法

酶橋法  
*首先用酶免疫動物,，制備效價高,、特異性強的抗酶抗體； *以二抗作橋,，將抗酶抗體聯(lián)結(jié)在一抗上,； 
*再將酶結(jié)合在抗酶抗體上，經(jīng)顯色顯示抗原的分布 
-優(yōu)點：任何抗體均未被酶標(biāo)記,。酶是通過免疫學(xué)原理與酶抗體結(jié)合的,。避免了共價連接對抗體和酶活性的損害，提高了方法的敏感性,，而且節(jié)省一抗的用量,。但抗酶抗體不易純化。  
幾點說明 

*一抗(假設(shè)來自種屬A)的稀釋度可大些,，使抗體的兩個Fab段均與組織抗原結(jié)合,。 
*二抗——橋抗體(抗種屬A的IgG抗體)應(yīng)過量，使其Fab段一個與一抗結(jié)合,，另一個則游離,。 
*因抗酶抗體與一抗均系種屬A IgG，具有相同的抗原性,，所以橋抗體游離的Fab能與抗酶抗體結(jié)合,，起橋作用，將其連接在與組織抗原結(jié)合的一抗上。  
PAP法 
* 與酶橋法相似,，不同的是,，PAP 法將酶橋法的第 3、4 步并為1步,，用PAP復(fù)合物代替,。 *PAP是離體制備的復(fù)合物( HRP--抗 HRP)。 
*顯色與酶橋法相同,，PAP復(fù)合物中的過氧化物酶催化底物水解,，形成不溶性終產(chǎn)物。 PAP法評價 
*PAP法比直接法,、間接法,、酶橋法更敏感。特別適用于石蠟切片中微量抗原和抗原性減弱抗原的檢測,。 
-缺點：步驟較多,，時間較長，不適用于臨床常規(guī)檢查,。 *由于常做石蠟切片,，故可用于回顧性研究。  
親和組織化學(xué)法  
*是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ),。 
*這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位。