目的 ：

建立微生物鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，使其規(guī)范化,、合理化

范圍：

環(huán)境監(jiān)測(cè),、生產(chǎn)設(shè)備、藥品進(jìn)廠原料及成品微生物檢測(cè)和水質(zhì)檢測(cè)過程中分離得到的微生物及工作菌株,。

職責(zé)：

1,、 質(zhì)量控制部檢驗(yàn)人員對(duì)具體操作負(fù)責(zé)；

2 ,、質(zhì)量保證部負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的執(zhí)行,。 

內(nèi)容 ：

1、概述 
微生物是對(duì)藥品原料,、生產(chǎn)環(huán)境和成品造成污染的重要因素,，也是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格,、直接或間接對(duì)人類造成危害的重要因素,。因此，對(duì)從藥品原料,、生產(chǎn)環(huán)境,、檢測(cè)環(huán)境、設(shè)備和成品微生物檢測(cè)過程中分離得到的污染微生物進(jìn)行鑒定,，是十分必要的,，也可為檢驗(yàn)和生產(chǎn)提供有效的依據(jù)。微生物鑒定應(yīng)遵循逐步縮小的原則,，用細(xì)菌分類學(xué)的知識(shí)和操作步驟,，逐步將未知微生物落實(shí)到科、屬,、種,。 

2 、菌株采集 
從藥品原料,、成品檢驗(yàn),、環(huán)境監(jiān)測(cè)和水質(zhì)檢測(cè)過程中，采集菌株,。 

3 ,、菌株純化 
無菌操作用接種環(huán)挑取待鑒定菌落或少許含菌液到相應(yīng)的培養(yǎng)基上劃線分離，純化培養(yǎng),。

4 ,、鑒定程序

培養(yǎng)特征 ：菌落形態(tài),，如形狀、大小,、色澤,、隆起、表面狀況,、質(zhì)地,、光澤、水溶性色素等,。

細(xì)胞形態(tài)：在顯微鏡下,，仔細(xì)觀察細(xì)胞形態(tài) 

形狀：如球狀、桿狀,、螺旋狀,、弧狀、絲狀及特殊形狀,。

大?。褐匾氖羌?xì)胞的寬度或直徑。 

排列：?jiǎn)蝹€(gè),、成對(duì),、成鏈或其他特殊的排列方式。

特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu) 
鞭毛：有無鞭毛,、著生位置及其數(shù)量。 

芽孢：有無芽孢,、形狀,、著生位置、孢囊是否膨大,。

孢子：孢子形狀,、著生位置、數(shù)量及排列,。

運(yùn)動(dòng)性：鞭毛泳動(dòng),、滑動(dòng)、螺旋體運(yùn)動(dòng)方式,。 

革蘭氏染色反應(yīng)：呈陽性或陰性

革蘭氏染色試驗(yàn) 

原理：革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁較厚,，細(xì)胞壁中的肽聚糖含量高且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密，含脂量又低,，當(dāng)用結(jié)晶紫復(fù)合溶液染色細(xì)胞后用脫色劑脫色時(shí),，引起了細(xì)胞壁肽聚糖層風(fēng)狀結(jié)構(gòu)的孔徑縮小以至關(guān)閉，阻止了結(jié)晶紫－碘復(fù)合物的逸出,，故菌體呈現(xiàn)深紫色,；革蘭氏陰性細(xì)菌呈現(xiàn)復(fù)染液的紅色,。 

操作：在潔凈的載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水，用接種環(huán)挑取少量菌齡為培養(yǎng)18～24小時(shí)的菌苔,，涂片經(jīng)火焰固定,，加結(jié)晶紫染液染1分鐘，水洗干凈,；滴加革蘭氏碘液復(fù)染1分鐘,，水洗，瀝干,；滴加95%乙醇脫色,，約20～30秒，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紫色為止,，水洗,；滴加番紅染液復(fù)染1～2分鐘，水洗,，待干,。油鏡檢查。 

陽性－陰性對(duì)照控制：取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌懸液,，制成涂片,，分別染色操作后作為革蘭氏陽性和陰性的對(duì)照控制。 
結(jié)果判斷：菌體呈藍(lán)紫色為革蘭氏陽性菌,；菌體呈紅色為革蘭氏陰性菌,。

在以下情況必須進(jìn)行微生物鑒定

新購進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)傳代菌株。

產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)或出現(xiàn)異常,。 

控制菌檢查出現(xiàn)異常時(shí),，如有菌生長(zhǎng)，不管是否典型菌生長(zhǎng),，均需鑒定,。

水質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，微生物檢測(cè)結(jié)果超過行動(dòng)限,。

環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí),，微生物檢測(cè)結(jié)果超過行動(dòng)限。