方法原理:將營養(yǎng)培養(yǎng)基,、凝膠和氯化三苯基四氮唑(TTC)顯色劑等加載在試紙片,,經(jīng)加樣、培養(yǎng)后,,細菌菌落在測試片上顯現(xiàn)出紅色菌斑,,通過計數(shù)報告結(jié)果。
檢測方法:
1.樣品處理:無菌稱取樣品25g(或25mL)放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi),,經(jīng)充分振搖(均質(zhì))做成1:10的稀釋液,。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi),,用1mL滅菌吸管反復(fù)吸吹制成1:100的稀釋液,。以此類推,做出1:1000等稀釋度的稀釋液,,每個稀釋度更換一支滅菌吸管,。
2.接種:一般食品選2~3個稀釋度進行檢測,含菌量少的液體樣品(如食用純水和礦泉水等)可直接用原液檢測,。將測試片放在水平臺面上,,揭開上面的透明薄膜,,用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL,,均勻加到中央的紙片上,輕輕將上蓋膜放下,,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固,,zui后用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。
3.培 養(yǎng):將測試片疊在一起放回原自封袋中,,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),,堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,,培養(yǎng)15~24h,。
4.結(jié)果判斷與計數(shù):
細菌在紙片上生長后會顯示紅色斑點,選擇菌落數(shù)適中(10個~100個)的紙片進行計數(shù),,乘以稀釋倍數(shù)后即為每克(或毫升)樣品中所含的細菌菌落總數(shù),。菌落數(shù)在100以內(nèi)時,按實有數(shù)報告,。大于100時,,用二位有效數(shù)字,二位有效數(shù)字后面的數(shù)字,,以四舍五入方法計算,,并以10的指數(shù)來表示。
注意事項:使用過的紙片上帶有活菌,,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理,。
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