免疫組化非特異性染色及控制方法
一,、非特異性染色的識別
常出現(xiàn)在組織邊緣,、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處,。表現(xiàn)為彌漫性,,均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應(yīng)產(chǎn)物點,、團或塊狀,。
二、非特異性染色的原因
1. Ig與Fc受體結(jié)合
多見于冰凍切片(特別是淋巴造血組織,,淋巴細胞,,單核細胞,組織細胞表面多),,主要是和二抗反應(yīng),,因為一抗一般稀釋度均較大,因此Fc受體的干擾基本不存在,。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體,,所以石蠟切片不多見,。
避免方法:
(1)用以二抗相同種族的正常血清封閉切片;
(2)用不含F(xiàn)c段的抗體,,但價格貴,。(V區(qū),C1區(qū)不含F(xiàn)c段,,用Pepsin消化)
2. 靜電吸附
抗體是一種帶負電荷的球蛋白,,容易和帶正電荷的組織相結(jié)合,如膠原纖維,。
避免方法:
(1)盡量稀釋一抗;
(2)降低抗體的電荷,,如用2.5%NaCl,,0.05mTBS代替PBS;
(3)用去垢劑如triton-100,,Tween-20等處理切片,。
3. 二抗與組織中的Ig結(jié)合
如羊抗兔的二抗,二抗可以標本中(人)Ig發(fā)生交叉反應(yīng),,科學(xué)上越接近的動物,,交叉反應(yīng)越明顯,如人與猴,,兔與豚鼠,。
避免方法:用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清,。
4. 組織中殘存醛基與Ig的結(jié)合
如醛類固定后未能*的沖洗,,殘留醛基可以和Ig結(jié)合。
避免方法:
(1)*沖洗,;
(2)0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗,。
5. 內(nèi)源性過氧化物酶
紅細胞,粒細胞的含量尤其高,,鏡下可以識別,,不要將其當成陽性結(jié)果。
避免方法:
(1)石蠟切片 0.3%雙氧水-甲醇溶液處理切片,;
(2)冰凍切片 3%雙氧水處理切片5分鐘(99:1)因為未經(jīng)固定包埋,,大部分酶未被破壞;
(3)對于骨髓涂片 用非過氧化物酶標記的抗體
6. 內(nèi)源性生物素
以 24mg/ml的卵白素封片15分鐘,。
7. 交叉反應(yīng)
PcAb敏感性高,,但特異性稍低,容易出現(xiàn)非特異性染色,。
避免方法:
(1)盡可能稀釋抗體,;
(2)盡可能用McAb,。
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