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大鼠反應(yīng)蛋白(CRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書   

 
本試劑盒僅供研究使用,。 
檢測范圍：80µg/L -2400µg/L          

使用目的 ： 本試劑盒用于測定大鼠血清樣本中 C-反應(yīng)蛋白(CRP)含,。 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平,。用純化的大鼠 C反應(yīng)蛋白(CRP)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 C-反應(yīng)蛋白 (CRP),，再與 HRP 標(biāo)記的 C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物， 過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn) 化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 C-反應(yīng)蛋白(CRP)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)濃度。  

試劑盒組成  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（4800µg/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張   6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標(biāo)本要求  1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。 操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。 2400µg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1200µg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 600µg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 300µg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150µg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
 
 
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡

 
 
不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。    4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次,，拍干,。 6. 加酶：孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外,。  7. 溫育：操作同 3,。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘. 10. 終止：孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。 
 
計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),， 即為樣品的實(shí)際濃度。  

 
 注意事項 1．試劑盒從冷環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)多,，推薦使用排槍加樣。 4． 請次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。 5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。 6．底物請避光保存,。 7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。 9．本試劑不同批號組分不得混用。 

保存條件及有效期 1．試劑盒保存：,；2-8℃,。 2．有效期：6 個月