每當拿到一個質粒圖譜，是不是一下就有點懵了,？這些ori、RBS,、tet是什么？這些箭頭代表什么,，轉錄的方向嗎,？不要著急,，申知心生物把這些告訴你,，也許會解決你的困惑。

質粒和載體傻傻分不清楚
質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒,、又胞附殖粒),。大部分的質粒雖然都是環(huán)狀構型。

載體即要把一個有用的基因（目的基因——研究或應用基因）通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞）,，需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞,，這種運載工具就叫做載體（vector）。細菌或病毒質粒是重組DNA技術中常用的載體,。

簡而言之,，質粒可以說是一個統(tǒng)稱,，載體是質粒改造過用來運載的工具

選用質粒做載體的要求
以常用的為例
（1）選分子量小的質粒,，即小載體（1－1.5kb）→不易損壞，在細菌里面拷貝數(shù)也多（也有大載體）,；
（2）一般使用松弛型質粒在細菌里擴增不受約束,，一般 10 個以上的拷貝，而嚴謹型質粒<10 個,。
（3）必需具備一個以上的酶切位點,，有選擇的余地；
（4）必需有易檢測的標記,，多是抗生素的抗性基因,，不特指多位 Ampr。
無論選用哪種載體,，先都要獲得載體分子,，然后采用適當?shù)南拗泼笇⑤d體 DNA 進行切割，獲得分子,，以便于與目的基因片段進行連接,。

如何一眼看穿質粒圖譜
①  復制起始位點Ori，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒）,，Ori的箭頭指復制方向,，其他元件標注的箭頭多指轉錄方向（正向）,。

②  再看篩選標記，如抗性,，決定使用什么篩選標記：
Ampr：水解β-內酰胺環(huán),，解除氨芐的毒性。
tetr ：可以阻止四環(huán)素進入細胞,。
camr：生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。
neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉移酶,，使G418（卡那霉素衍生物）失活。
hygr：使潮霉素β失活,。

③  看多克隆位點（MCS）：它具有多個限制內切酶的單一切點（質粒上只能有該內切酶的*酶切序列,，不然就一刀好幾段了），便于咱們要研究的基因的插入,。如果在這些位點外有外源基因的插入,，會導致某種標志基因的失活，而便于篩選,，常見的是β-半乳糖苷酶的藍白斑篩選系統(tǒng),。

④再看外源DNA插入片段大小：質粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA的片段,。一般來說,，外源DNA的片段越長，越難插入,，越不穩(wěn)定,，轉化效率越低。

⑤ 是否含有表達系統(tǒng)元件,，即啟動子（promoter）－核糖體結合位點（RBS）－轉錄終止信號（AATAAA同時是poly A）,。這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體,。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩,。

⑥看報告基因：主要是為了能迅速檢查功能基因是否表達的陽性判斷,，表達成功的蛋白在小鼠體內分布位置。
 
⑦看質粒圖譜上的箭頭：它代表DNA兩條鏈（正義鏈和反義鏈）,，即質粒是環(huán)狀雙鏈DNA,，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上,。
目的基因片段進行連接,。