大鼠肝脂酶（HL）ELISA試劑盒資料說明書 
本試劑盒僅供研究使用,。 
檢測范圍：   
10µmol/L -360µmol/L 
 
使用目的： 本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中肝脂酶（HL）含量,。 實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肝脂酶（HL）水平,。用純化的大鼠肝脂酶 （HL）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入肝脂酶（HL）,，再 與 HRP 標記的肝脂酶（HL）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后 加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃 色,。顏色的深淺和樣品中的肝脂酶（HL）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度 （OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠肝脂酶（HL）濃度,。  試劑盒組成  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（720µmol/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張   6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個 標本要求  1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋,。 360µmol/L 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 180µmol/L 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 90µmol/L 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 45µmol/L 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 22.5µmol/L 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 
 
 
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） ,、標準孔,、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，
然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。    4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此 重復(fù) 5 次，拍干,。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外。  7. 溫育：操作同 3,。 8. 洗滌：操作同 5,。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 15 分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。 11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。 操作程序總結(jié)： 
 
 
大鼠肝脂酶（HL）ELISA試劑盒資料計算   以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。  注意事項 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。 2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。 4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。 6．底物請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用,。 10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

大鼠肝脂酶（HL）ELISA試劑盒資料保存條件及有效期 1．試劑盒保存： ,；2-8℃。 2．有效期：6 個月