小鼠甘油三酯(TG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒

Mouse Triglyceride(TG)ELISA Kit
樣本處理：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上
清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞
濃度達到 100 萬/ml 左右,。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心 20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用,。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測,，其余冷凍備用,。
標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上
進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,，不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后從*孔,、第二
孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，
混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔
中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl,，
濃度分別為 1.8mmol/L，1.2 mmol/L,，0.6mmol/L,，0.3mmol/L，0.15mmol/L）,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
5. 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5 次，拍干,。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯
色 10 分鐘.
8. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
試劑盒供應(yīng)商：上海華壹生物科技有限公司