顯微注射泵系統(tǒng)研發(fā)背景：

　　在高倍倒置顯微鏡下,，利用顯微操作器（Micromanipulator）,，控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動的機械裝置，用來進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎以及動物組織顯微操作的一種方法,。而的顯微注射技術(shù),，已經(jīng)廣泛擴大到動物育種,、瀕危物種保護、試管嬰兒,、基因編輯,、基因敲除,、光遺傳學(xué)研究、神經(jīng)回路研究,、納米顆粒捕獲,、工程微藻篩選,、微流控芯片技術(shù)等方面。

 以細(xì)胞內(nèi)微注射和微灌注技術(shù)為基礎(chǔ)的玻璃針頭(GlassNeedle,，玻璃微量毛細(xì)移液管)的使用,，已經(jīng)在越來越多的實驗生物學(xué)研究領(lǐng)域中成為一項非常普遍的操作方法,，比如在轉(zhuǎn)基因中等等,。描述這些技術(shù)zui恰當(dāng)?shù)脑拺?yīng)當(dāng)稱其為---顯微操作，因為這些操作是通過單個的或多個的筒狀玻璃微量移液管,、定位裝置（顯微操作器）以及微量注射器或微量灌注器來在單個的細(xì)胞上進(jìn)行的,。

 顯微注射應(yīng)用的范圍非常廣泛，從輔助（體外）細(xì)胞受精技術(shù)至分子和細(xì)胞基本組分的轉(zhuǎn)運都需使用這一技術(shù),，比較典型的是將某些物質(zhì)注射進(jìn)細(xì)胞中以操作和/或監(jiān)測某種特定的存活細(xì)胞中的基本機體生物化學(xué)狀態(tài)。這些可以注射進(jìn)細(xì)胞的物質(zhì)包括有：各種細(xì)胞器,、激酶,、組織化學(xué)標(biāo)志物（比如辣根過氧化物酶或者熒光黃）、蛋白質(zhì),、代謝物質(zhì),、微磁頭、離子,、抗體、基因,、分子生物學(xué)的mRNA和DNA等等,。運用這一技術(shù),，也可以實現(xiàn)用于單個細(xì)胞或一組細(xì)胞的較少量（皮升至毫升）藥劑或藥物的輸送（微灌注），例如藥理學(xué)的藥物檢驗,。轉(zhuǎn)基因動物的制作，可以利用基因微注射（gene microinjection）,、胚干細(xì)胞（embryonic stem cells,ES cells）,、載體（sperm vector）,、反轉(zhuǎn)錄病毒感染（retroviral vectorinfection）及體細(xì)胞核移置（somatic cell nucleartransfer）等方法達(dá)成，其中顯微注射為目前應(yīng)用zui普遍之方法之一,。

 顯微注射法（microinjection）是利用管尖極細(xì)（0.1至0.5μm）的玻璃微量注射針，將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養(yǎng)的細(xì)胞中,，然后藉由宿主基因組序列可能發(fā)生的重組（rearrangement）,、缺失（deletion）、復(fù)制（duplication）或易位（translocation）等現(xiàn)象而使外源基因嵌入宿主的染色體內(nèi),。這種顯微注射術(shù)的程序,，需有相當(dāng)精密的顯微操作設(shè)備,，制造長管尖時，需用微量吸管拉長器（micropipettepuller）,，注射時需有固定管尖位置的微量操作器,。這種技術(shù)的長處為任何DNA在原則上均可傳入任何種類的細(xì)胞內(nèi),。此法已成功運用于包括小鼠、魚,、大鼠,、兔子及許多大型家畜,，如牛、羊,、豬等基因轉(zhuǎn)殖動物,。

顯微注射泵系統(tǒng)功能簡介及選購方案建議：

 在顯微注射技術(shù)中，zui重要的一環(huán)或者說設(shè)備是顯微注射泵,，而由此發(fā)展而來的一套精密儀器設(shè)備，統(tǒng)稱為顯微注射泵系統(tǒng),。顯微注射泵系統(tǒng)主要包括：顯微注射泵主機,、顯微操作儀,、動力源和顯微注射針。

 各種不同顯微注射泵系統(tǒng)的歸類主要依據(jù)該技術(shù)所依靠的顯微注射泵主機來劃分,，目前上通用的顯微注射泵主要分為三種類型,；氣壓脈沖驅(qū)動的氣泵,，納米步進(jìn)電機程控的電動泵和液壓驅(qū)動的手動注射泵。

　　1.液壓驅(qū)動的手動注射泵由操作人員手動旋轉(zhuǎn)刻度旋鈕，通過壓縮的液體前推或者回吸管路中的液體,，從而控制顯微注射泵注射針的樣品液向前注射或者回抽胞內(nèi)物質(zhì)等，由于液體壓力有一定的遲緩性和可壓縮性,，使得操作人員無法準(zhǔn)確控制液壓類型的顯微操作儀的注射量或者回吸量,，并且液壓手動顯微操作儀由于前推或者回吸壓力比較小，對于細(xì)胞內(nèi)壓較大或者回吸阻力大,，以及對于需要控制注射或回吸量的顯微注射操作來說，并不合適,。但是液壓驅(qū)動的手動注射泵由于其價格實惠,，能夠滿足一般實驗室對于顯微注射操作的需求，所以對于部分實驗室使用者來說,，有其選購的理由和價值,，推薦型號如圖：（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）液壓手動注射泵。

2.氣壓驅(qū)動的顯微注射泵系統(tǒng),，本系列設(shè)備通過注射泵主機后面板接口連接壓力氣瓶（通常為氮氣、空氣等）,，主機設(shè)置脈沖“注射”壓力,、注射時間以及依據(jù)注射時的玻璃注射針規(guī)格，將位于玻璃注射針內(nèi)的樣品注射到被注射物內(nèi)部,。

　　推薦型號為數(shù)顯氣動皮升注射泵是通過芯片控制注射時的脈沖壓力、注射時間以及依據(jù)玻璃注射針的規(guī)格等,，將樣品（如藥物,、核酸類物質(zhì),、染料,、慢病毒,、神經(jīng)遞質(zhì)、基因編輯工具等）通過玻璃注射針注射到目標(biāo)物中，注射體積范圍從pl到ul不等,。被注射物有哺乳動物細(xì)胞,、魚類卵細(xì)胞（如斑馬魚、青鳉,、鱖魚等）及魚類幼體、珊瑚蟲卵細(xì)胞,、線蟲,、果蠅,、飛蛾、白蟻,、嚙齒類動物顱腦組織等,，可用于遺傳學(xué)研究,、基因干擾、轉(zhuǎn)基因動物育種,、基因編輯,、光遺傳學(xué)研究,、神經(jīng)回路研究、生殖醫(yī)學(xué)健康研究,、試管嬰兒等領(lǐng)域,，亦可用于顆粒捕獲，如目標(biāo)微藻的挑取,、納米材料顆粒的捕獲等。PLI系列數(shù)顯皮升注射泵包括的型號有：PLI-10,，PLI-90A,，PLI-100A等,。其中PLI-100A有五種壓力選擇如：注射，平衡,，清除,，填注，固定,。各種壓力數(shù)值、注射時間以及注射操作計數(shù)等參數(shù)均通過前面板上的數(shù)顯屏分別實時顯示,。

   優(yōu)點：“平衡”壓力在每次注射脈沖之間讓玻璃注射針（玻璃毛細(xì)管）保持低的正性維持壓,，以阻止液體通過毛細(xì)管虹吸作用或擴散的方式回吸（此壓力對于細(xì)胞內(nèi)壓較大的被注射物的注射操作特別有益處）。“清除”壓力主要用來防止玻璃注射針堵管問題或者處理被注射物保護膜比較厚,，通過合適脈沖對保護膜穿孔的情況。“填注”壓力為負(fù)壓,，用于對玻璃注射針管進(jìn)行樣品液的充液,。“固定”壓力也為負(fù)壓，主要用于吸附支持被注射的物體,，如卵細(xì)胞,、昆蟲幼體等,，防止被注射物滑動而造成顯微注射操作的失敗,。

  不足的特性：無法達(dá)到的確定注射量,，因為氣動注射泵單次注射的量與注射時脈沖壓力選擇,、脈沖時間長度、玻璃注射針的長短和形狀及開口大小,、注射液的粘度均有關(guān)系,，以上參數(shù)如果無法*保持一致，則兩次注射或回吸的微量體積均不同,；同時，通過氣壓脈沖控制的皮升注射泵,，需要操作者有比較熟練的顯微操作經(jīng)驗,，了解實驗中常用被注射物所需的注射體積和注射位點,，多次操作訓(xùn)練后，才能實現(xiàn)重復(fù)性比較高的顯微操作注射量數(shù)據(jù),，間接地影響了實驗效率和初學(xué)者實驗的成功率,。

  市場上成熟的氣壓動力來源注射泵推薦型號為數(shù)顯氣動皮升注射泵（武漢蓋爾德納科技有限公司提供，Gairdner Tech），如圖所示：

此系列數(shù)顯氣動皮升注射泵主要應(yīng)用前景為：

1.魚類遺傳學(xué)研究應(yīng)用：

●用于斑馬魚,、青鳉、中華鱘,、黑斑原鮡等魚類卵細(xì)胞及魚類幼體的核酸類物質(zhì),、染料、功能蛋白,、慢病毒等的注射；

●用于海洋生物如珊瑚蟲等的遺傳學(xué)研究,；

2.腦科學(xué)研究的應(yīng)用：

●用于光遺傳學(xué)研究中慢病毒等物質(zhì)的動物顱內(nèi)注射,；

●用于神經(jīng)回路研究中藥物、染料或神經(jīng)遞質(zhì)的動物顱內(nèi)免震動注射,；

●用于感染與免疫科學(xué)研究中細(xì)菌毒素、病毒等侵入腦組織的相關(guān)研究及治療性藥物的腦組織注射,；

●用于神經(jīng)類藥物研究中,，藥物透過血腦屏障等相關(guān)研究；

3.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物、核酸物質(zhì)或染料注射,；

●用于果蠅,、棉鈴蟲,、褐飛虱等體內(nèi)藥物、核酸物質(zhì)或染料注射,，涉及植物防蟲研究,、昆蟲遺傳學(xué)研究等；

4.用于斑紋螺,、爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射；

5.嚙齒類動物的研究應(yīng)用：

●用于鼠類,、試驗兔等腦內(nèi)深部組織的藥物,、核酸類物質(zhì)、神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射,；

●用于鼠類,、試驗兔及其他動物的肢體器官或組織微損傷藥物、染料或其他物質(zhì)的注射,，包括炎癥研究,、光遺傳研究等,；

6.用于生殖醫(yī)學(xué)研究：

●用于人工受精、試管嬰兒以及人類生殖健康學(xué),、優(yōu)生優(yōu)育遺傳學(xué)研究等,；

7.用于動物育種改良、轉(zhuǎn)基因及基因編輯技術(shù)研究：

●哺乳動物如豬,、牛、山羊等動物體細(xì)胞或卵細(xì)胞的核移植或基因編輯工具注射,，涉及動物育種學(xué),、遺傳改良,、轉(zhuǎn)基因動物、基因編輯技術(shù)等,；

8.納米材料科學(xué)及微藻環(huán)境污染治理等研究：

●用于納米材料顆粒及目標(biāo)微藻的捕獲，分別涉及到納米生物醫(yī)用材料,、納米載藥系統(tǒng)和基因工程微藻治理環(huán)境污染,、功能微藻能源物質(zhì)生產(chǎn)等,。

   3.納米步進(jìn)電機驅(qū)動的程控顯微注射泵系統(tǒng)，主要依據(jù)顯微控制電腦,，在顯微控制電腦上設(shè)置好注射或者回吸所需的準(zhǔn)確體積（分辨率zui小1pl），完成注射/回吸所需的時間,，以及操作過程自動完成的速率等參數(shù),，只需要要操作者按下開始開關(guān)或者腳踏開關(guān),，那么設(shè)置好的顯微注射程序就會自動地將樣品液注射到目標(biāo)物中。

   納米電機驅(qū)動的程控顯微注射泵我們主要推薦市場使用成熟穩(wěn)定的NanojectIII和QSI系統(tǒng),，其中Nanoject III系統(tǒng)是一代可編程顯微注射泵系統(tǒng),，非常適合用于定量定速對卵母細(xì)胞及動物幼體,、原生動物,、動物顱腦等的顯微注射或抽吸操作。它可提供快速,、的zui少0.6nL的任意編程體積注射或抽吸,，一次操作可注射或抽吸可達(dá)4200nL體積的樣品液。注射過程中使用玻璃毛細(xì)管,，并用礦物油來充滿毛細(xì)管，再將礦物油大部分推出,，然后將注射液體回抽到玻璃毛細(xì)管前面,。對于部分操作實驗,，亦可直接將注射液體灌充玻璃毛細(xì)管或者直接回抽注射液體，而不需要先填充礦物油,。（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）推薦型號如圖所示：

NanojectIII主要應(yīng)用前景為：

1.斑馬魚等魚類研究的應(yīng)用：

●用于斑馬魚及其他魚類卵細(xì)胞基因或染料的注射或抽吸,；

●用于斑馬魚及其他魚類幼魚體內(nèi)注射或抽吸；

2.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲,、蠕蟲,、果蠅、棉鈴蟲,、褐飛虱等卵細(xì)胞注射或抽吸；

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物或染料注射,；

●用于果蠅、棉鈴蟲,、褐飛虱體內(nèi)藥物或染料注射；

3.用于爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射,；

4.嚙齒類動物的研究應(yīng)用：

●用于大鼠、小鼠等腦內(nèi)深部組織的藥物或神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射,；

●用于大鼠及小鼠卵細(xì)胞及胚胎基因物質(zhì),、藥物及染料注射等。

 而我們推薦的另外一套納米步進(jìn)電機驅(qū)動的顯微注射泵系統(tǒng)為超微量定位注射泵QSI是一代固定于腦立體定位儀或者顯微操作儀,，進(jìn)行腦內(nèi)注射應(yīng)用的*儀器。QSI是目前市面上*能zui小注射量達(dá)到1pl,，注射流速為0.05nl/min-520ul/min的超微量注射泵,。本型號注射泵可以直接放置0.5ul到250ul容量的微量注射器,，并且匹配市面上絕大多數(shù)廠家生產(chǎn)的微量注射器型號，只需要簡單地從儀器的全觸屏微電腦控制器上選擇信息庫中對應(yīng)的注射器品牌和規(guī)格,，即可實現(xiàn)體積和流速的注射或回吸操作,。

推薦型號QSI（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）如圖所示：

此系列型號主要應(yīng)用前景為：

1.腦科學(xué)研究的應(yīng)用：

●用于光遺傳學(xué)研究中慢病毒等物質(zhì)的動物顱內(nèi)注射,；

●用于神經(jīng)回路研究中藥物、染料或神經(jīng)遞質(zhì)的動物顱內(nèi)注射,；

●用于感染與免疫科學(xué)研究中細(xì)菌毒素、病毒等侵入腦組織的相關(guān)研究,；

●用于神經(jīng)類藥物研究中,，藥物透過血腦屏障等相關(guān)研究；

2.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物、核酸物質(zhì)或染料注射,；

●用于果蠅,、棉鈴蟲,、褐飛虱體內(nèi)藥物,、核酸物質(zhì)或染料注射；

3.用于爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射,；

4.嚙齒類動物的研究應(yīng)用：

●用于大鼠、小鼠等腦內(nèi)深部組織的藥物,、核酸類物質(zhì),、神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射；

●用于大鼠,、小鼠及其他動物的器官或組織微損傷藥物,、染料或其他物質(zhì)的注射,。

關(guān)于在納米步進(jìn)電機驅(qū)動的顯微注射泵選擇上，NanojectIII和QSI均具有自動化程度高,，易于初學(xué)者上手使用快,，操作簡單，程控等特點,，但是NanojectIII與QSI功能略有不同，其中QSI前端直接控制的注射針為微量注射器,，為鋼針注射頭,，可以注射動物組織,，但是如需要注射更微小的細(xì)胞或者為了避免對活體動物造成損傷，我們建議在鋼針針頭前用熱熔膠接上一段玻璃注射針針頭,。而NanojectIII（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）則不需要此熱熔膠轉(zhuǎn)接操作,，因為該型號注射泵前端直接配備的為玻璃注射針針頭，可以直接使用,。

各個科研院所的實驗人員,，在選擇顯微注射泵系統(tǒng)前，應(yīng)該提前統(tǒng)計和預(yù)估本研究所將要注射的被注射物樣本為哪種,，需要達(dá)到的顯微注射準(zhǔn)確性要求有多高，本實驗室的預(yù)算經(jīng)費為多少,，實驗操作者的技術(shù)水平程度,，以及后續(xù)對設(shè)備的維護費用，空間占用率,、設(shè)備使用率等方面考慮，選擇*的顯微注射泵系統(tǒng)選擇方案,。