顯微注射泵系統(tǒng)研發(fā)背景：

　　在高倍倒置顯微鏡下,，利用顯微操作器（Micromanipulator），控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置,，用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎以及動(dòng)物組織顯微操作的一種方法,。而的顯微注射技術(shù)，已經(jīng)廣泛擴(kuò)大到動(dòng)物育種,、瀕危物種保護(hù),、試管嬰兒、基因編輯,、基因敲除,、光遺傳學(xué)研究,、神經(jīng)回路研究、納米顆粒捕獲,、工程微藻篩選,、微流控芯片技術(shù)等方面。

 以細(xì)胞內(nèi)微注射和微灌注技術(shù)為基礎(chǔ)的玻璃針頭(GlassNeedle,，玻璃微量毛細(xì)移液管)的使用,，已經(jīng)在越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)生物學(xué)研究領(lǐng)域中成為一項(xiàng)非常普遍的操作方法，比如在轉(zhuǎn)基因中等等,。描述這些技術(shù)zui恰當(dāng)?shù)脑拺?yīng)當(dāng)稱其為---顯微操作,，因?yàn)檫@些操作是通過(guò)單個(gè)的或多個(gè)的筒狀玻璃微量移液管、定位裝置（顯微操作器）以及微量注射器或微量灌注器來(lái)在單個(gè)的細(xì)胞上進(jìn)行的,。

 顯微注射應(yīng)用的范圍非常廣泛,，從輔助（體外）細(xì)胞受精技術(shù)至分子和細(xì)胞基本組分的轉(zhuǎn)運(yùn)都需使用這一技術(shù)，比較典型的是將某些物質(zhì)注射進(jìn)細(xì)胞中以操作和/或監(jiān)測(cè)某種特定的存活細(xì)胞中的基本機(jī)體生物化學(xué)狀態(tài),。這些可以注射進(jìn)細(xì)胞的物質(zhì)包括有：各種細(xì)胞器,、激酶、組織化學(xué)標(biāo)志物（比如辣根過(guò)氧化物酶或者熒光黃）,、蛋白質(zhì),、代謝物質(zhì)、微磁頭,、離子,、抗體、基因,、分子生物學(xué)的mRNA和DNA等等,。運(yùn)用這一技術(shù)，也可以實(shí)現(xiàn)用于單個(gè)細(xì)胞或一組細(xì)胞的較少量（皮升至毫升）藥劑或藥物的輸送（微灌注）,，例如藥理學(xué)的藥物檢驗(yàn),。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制作，可以利用基因微注射（gene microinjection）,、胚干細(xì)胞（embryonic stem cells,ES cells）,、載體（sperm vector）、反轉(zhuǎn)錄病毒感染（retroviral vectorinfection）及體細(xì)胞核移置（somatic cell nucleartransfer）等方法達(dá)成,，其中顯微注射為目前應(yīng)用zui普遍之方法之一,。

 顯微注射法（microinjection）是利用管尖極細(xì)（0.1至0.5μm）的玻璃微量注射針，將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養(yǎng)的細(xì)胞中,，然后藉由宿主基因組序列可能發(fā)生的重組（rearrangement）,、缺失（deletion）、復(fù)制（duplication）或易位（translocation）等現(xiàn)象而使外源基因嵌入宿主的染色體內(nèi)。這種顯微注射術(shù)的程序,，需有相當(dāng)精密的顯微操作設(shè)備,，制造長(zhǎng)管尖時(shí)，需用微量吸管拉長(zhǎng)器（micropipettepuller）,，注射時(shí)需有固定管尖位置的微量操作器,。這種技術(shù)的長(zhǎng)處為任何DNA在原則上均可傳入任何種類的細(xì)胞內(nèi)。此法已成功運(yùn)用于包括小鼠,、魚,、大鼠、兔子及許多大型家畜,，如牛,、羊、豬等基因轉(zhuǎn)殖動(dòng)物,。

顯微注射泵系統(tǒng)功能簡(jiǎn)介及選購(gòu)方案建議：

 在顯微注射技術(shù)中,，zui重要的一環(huán)或者說(shuō)設(shè)備是顯微注射泵，而由此發(fā)展而來(lái)的一套精密儀器設(shè)備,，統(tǒng)稱為顯微注射泵系統(tǒng),。顯微注射泵系統(tǒng)主要包括：顯微注射泵主機(jī)、顯微操作儀,、動(dòng)力源和顯微注射針,。

 各種不同顯微注射泵系統(tǒng)的歸類主要依據(jù)該技術(shù)所依靠的顯微注射泵主機(jī)來(lái)劃分，目前上通用的顯微注射泵主要分為三種類型,；氣壓脈沖驅(qū)動(dòng)的氣泵,，納米步進(jìn)電機(jī)程控的電動(dòng)泵和液壓驅(qū)動(dòng)的手動(dòng)注射泵。

　　1.液壓驅(qū)動(dòng)的手動(dòng)注射泵由操作人員手動(dòng)旋轉(zhuǎn)刻度旋鈕,，通過(guò)壓縮的液體前推或者回吸管路中的液體，從而控制顯微注射泵注射針的樣品液向前注射或者回抽胞內(nèi)物質(zhì)等,，由于液體壓力有一定的遲緩性和可壓縮性,，使得操作人員無(wú)法準(zhǔn)確控制液壓類型的顯微操作儀的注射量或者回吸量，并且液壓手動(dòng)顯微操作儀由于前推或者回吸壓力比較小,，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)壓較大或者回吸阻力大,，以及對(duì)于需要控制注射或回吸量的顯微注射操作來(lái)說(shuō)，并不合適,。但是液壓驅(qū)動(dòng)的手動(dòng)注射泵由于其價(jià)格實(shí)惠,，能夠滿足一般實(shí)驗(yàn)室對(duì)于顯微注射操作的需求，所以對(duì)于部分實(shí)驗(yàn)室使用者來(lái)說(shuō),，有其選購(gòu)的理由和價(jià)值,，推薦型號(hào)如圖：（武漢蓋爾德納科技有限公司提供，Gairdner Tech）液壓手動(dòng)注射泵。

2.氣壓驅(qū)動(dòng)的顯微注射泵系統(tǒng),，本系列設(shè)備通過(guò)注射泵主機(jī)后面板接口連接壓力氣瓶（通常為氮?dú)?、空氣等），主機(jī)設(shè)置脈沖“注射”壓力,、注射時(shí)間以及依據(jù)注射時(shí)的玻璃注射針規(guī)格,，將位于玻璃注射針內(nèi)的樣品注射到被注射物內(nèi)部。

　　推薦型號(hào)為數(shù)顯氣動(dòng)皮升注射泵是通過(guò)芯片控制注射時(shí)的脈沖壓力,、注射時(shí)間以及依據(jù)玻璃注射針的規(guī)格等,，將樣品（如藥物、核酸類物質(zhì),、染料,、慢病毒、神經(jīng)遞質(zhì),、基因編輯工具等）通過(guò)玻璃注射針注射到目標(biāo)物中,，注射體積范圍從pl到ul不等。被注射物有哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、魚類卵細(xì)胞（如斑馬魚,、青鳉、鱖魚等）及魚類幼體,、珊瑚蟲卵細(xì)胞,、線蟲、果蠅,、飛蛾,、白蟻、嚙齒類動(dòng)物顱腦組織等,，可用于遺傳學(xué)研究,、基因干擾、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種,、基因編輯,、光遺傳學(xué)研究、神經(jīng)回路研究,、生殖醫(yī)學(xué)健康研究,、試管嬰兒等領(lǐng)域，亦可用于顆粒捕獲,，如目標(biāo)微藻的挑取,、納米材料顆粒的捕獲等。PLI系列數(shù)顯皮升注射泵包括的型號(hào)有：PLI-10,，PLI-90A,，PLI-100A等。其中PLI-100A有五種壓力選擇如：注射，平衡,，清除,，填注，固定,。各種壓力數(shù)值,、注射時(shí)間以及注射操作計(jì)數(shù)等參數(shù)均通過(guò)前面板上的數(shù)顯屏分別實(shí)時(shí)顯示。

   優(yōu)點(diǎn)：“平衡”壓力在每次注射脈沖之間讓玻璃注射針（玻璃毛細(xì)管）保持低的正性維持壓,，以阻止液體通過(guò)毛細(xì)管虹吸作用或擴(kuò)散的方式回吸（此壓力對(duì)于細(xì)胞內(nèi)壓較大的被注射物的注射操作特別有益處）,。“清除”壓力主要用來(lái)防止玻璃注射針堵管問(wèn)題或者處理被注射物保護(hù)膜比較厚，通過(guò)合適脈沖對(duì)保護(hù)膜穿孔的情況,。“填注”壓力為負(fù)壓,，用于對(duì)玻璃注射針管進(jìn)行樣品液的充液。“固定”壓力也為負(fù)壓,，主要用于吸附支持被注射的物體,，如卵細(xì)胞、昆蟲幼體等,，防止被注射物滑動(dòng)而造成顯微注射操作的失敗,。

  不足的特性：無(wú)法達(dá)到的確定注射量，因?yàn)闅鈩?dòng)注射泵單次注射的量與注射時(shí)脈沖壓力選擇,、脈沖時(shí)間長(zhǎng)度,、玻璃注射針的長(zhǎng)短和形狀及開(kāi)口大小、注射液的粘度均有關(guān)系,，以上參數(shù)如果無(wú)法*保持一致,，則兩次注射或回吸的微量體積均不同；同時(shí),，通過(guò)氣壓脈沖控制的皮升注射泵,，需要操作者有比較熟練的顯微操作經(jīng)驗(yàn)，了解實(shí)驗(yàn)中常用被注射物所需的注射體積和注射位點(diǎn),，多次操作訓(xùn)練后,，才能實(shí)現(xiàn)重復(fù)性比較高的顯微操作注射量數(shù)據(jù)，間接地影響了實(shí)驗(yàn)效率和初學(xué)者實(shí)驗(yàn)的成功率,。

  市場(chǎng)上成熟的氣壓動(dòng)力來(lái)源注射泵推薦型號(hào)為數(shù)顯氣動(dòng)皮升注射泵（武漢蓋爾德納科技有限公司提供，Gairdner Tech）,，如圖所示：

此系列數(shù)顯氣動(dòng)皮升注射泵主要應(yīng)用前景為：

1.魚類遺傳學(xué)研究應(yīng)用：

●用于斑馬魚,、青鳉、中華鱘,、黑斑原鮡等魚類卵細(xì)胞及魚類幼體的核酸類物質(zhì),、染料、功能蛋白、慢病毒等的注射,；

●用于海洋生物如珊瑚蟲等的遺傳學(xué)研究,；

2.腦科學(xué)研究的應(yīng)用：

●用于光遺傳學(xué)研究中慢病毒等物質(zhì)的動(dòng)物顱內(nèi)注射；

●用于神經(jīng)回路研究中藥物,、染料或神經(jīng)遞質(zhì)的動(dòng)物顱內(nèi)免震動(dòng)注射,；

●用于感染與免疫科學(xué)研究中細(xì)菌毒素、病毒等侵入腦組織的相關(guān)研究及治療性藥物的腦組織注射,；

●用于神經(jīng)類藥物研究中,，藥物透過(guò)血腦屏障等相關(guān)研究；

3.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物,、核酸物質(zhì)或染料注射；

●用于果蠅,、棉鈴蟲,、褐飛虱等體內(nèi)藥物、核酸物質(zhì)或染料注射,，涉及植物防蟲研究,、昆蟲遺傳學(xué)研究等；

4.用于斑紋螺,、爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射,；

5.嚙齒類動(dòng)物的研究應(yīng)用：

●用于鼠類、試驗(yàn)兔等腦內(nèi)深部組織的藥物,、核酸類物質(zhì),、神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射；

●用于鼠類,、試驗(yàn)兔及其他動(dòng)物的肢體器官或組織微損傷藥物,、染料或其他物質(zhì)的注射，包括炎癥研究,、光遺傳研究等,；

6.用于生殖醫(yī)學(xué)研究：

●用于人工受精、試管嬰兒以及人類生殖健康學(xué),、優(yōu)生優(yōu)育遺傳學(xué)研究等,；

7.用于動(dòng)物育種改良、轉(zhuǎn)基因及基因編輯技術(shù)研究：

●哺乳動(dòng)物如豬,、牛,、山羊等動(dòng)物體細(xì)胞或卵細(xì)胞的核移植或基因編輯工具注射，涉及動(dòng)物育種學(xué),、遺傳改良,、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,、基因編輯技術(shù)等；

8.納米材料科學(xué)及微藻環(huán)境污染治理等研究：

●用于納米材料顆粒及目標(biāo)微藻的捕獲,，分別涉及到納米生物醫(yī)用材料,、納米載藥系統(tǒng)和基因工程微藻治理環(huán)境污染、功能微藻能源物質(zhì)生產(chǎn)等,。

   3.納米步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)的程控顯微注射泵系統(tǒng),，主要依據(jù)顯微控制電腦，在顯微控制電腦上設(shè)置好注射或者回吸所需的準(zhǔn)確體積（分辨率zui小1pl）,，完成注射/回吸所需的時(shí)間,，以及操作過(guò)程自動(dòng)完成的速率等參數(shù)，只需要要操作者按下開(kāi)始開(kāi)關(guān)或者腳踏開(kāi)關(guān),，那么設(shè)置好的顯微注射程序就會(huì)自動(dòng)地將樣品液注射到目標(biāo)物中,。

   納米電機(jī)驅(qū)動(dòng)的程控顯微注射泵我們主要推薦市場(chǎng)使用成熟穩(wěn)定的NanojectIII和QSI系統(tǒng)，其中Nanoject III系統(tǒng)是一代可編程顯微注射泵系統(tǒng),，非常適合用于定量定速對(duì)卵母細(xì)胞及動(dòng)物幼體,、原生動(dòng)物、動(dòng)物顱腦等的顯微注射或抽吸操作,。它可提供快速,、的zui少0.6nL的任意編程體積注射或抽吸，一次操作可注射或抽吸可達(dá)4200nL體積的樣品液,。注射過(guò)程中使用玻璃毛細(xì)管,，并用礦物油來(lái)充滿毛細(xì)管，再將礦物油大部分推出,，然后將注射液體回抽到玻璃毛細(xì)管前面,。對(duì)于部分操作實(shí)驗(yàn)，亦可直接將注射液體灌充玻璃毛細(xì)管或者直接回抽注射液體,，而不需要先填充礦物油,。（武漢蓋爾德納科技有限公司提供，Gairdner Tech）推薦型號(hào)如圖所示：

NanojectIII主要應(yīng)用前景為：

1.斑馬魚等魚類研究的應(yīng)用：

●用于斑馬魚及其他魚類卵細(xì)胞基因或染料的注射或抽吸,；

●用于斑馬魚及其他魚類幼魚體內(nèi)注射或抽吸,；

2.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲、蠕蟲,、果蠅,、棉鈴蟲、褐飛虱等卵細(xì)胞注射或抽吸,；

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物或染料注射；

●用于果蠅,、棉鈴蟲,、褐飛虱體內(nèi)藥物或染料注射；

3.用于爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射,；

4.嚙齒類動(dòng)物的研究應(yīng)用：

●用于大鼠,、小鼠等腦內(nèi)深部組織的藥物或神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射；

●用于大鼠及小鼠卵細(xì)胞及胚胎基因物質(zhì),、藥物及染料注射等,。

 而我們推薦的另外一套納米步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)的顯微注射泵系統(tǒng)為超微量定位注射泵QSI是一代固定于腦立體定位儀或者顯微操作儀，進(jìn)行腦內(nèi)注射應(yīng)用的*儀器,。QSI是目前市面上*能zui小注射量達(dá)到1pl,，注射流速為0.05nl/min-520ul/min的超微量注射泵。本型號(hào)注射泵可以直接放置0.5ul到250ul容量的微量注射器,，并且匹配市面上絕大多數(shù)廠家生產(chǎn)的微量注射器型號(hào),，只需要簡(jiǎn)單地從儀器的全觸屏微電腦控制器上選擇信息庫(kù)中對(duì)應(yīng)的注射器品牌和規(guī)格，即可實(shí)現(xiàn)體積和流速的注射或回吸操作,。

推薦型號(hào)QSI（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）如圖所示：

此系列型號(hào)主要應(yīng)用前景為：

1.腦科學(xué)研究的應(yīng)用：

●用于光遺傳學(xué)研究中慢病毒等物質(zhì)的動(dòng)物顱內(nèi)注射；

●用于神經(jīng)回路研究中藥物,、染料或神經(jīng)遞質(zhì)的動(dòng)物顱內(nèi)注射,；

●用于感染與免疫科學(xué)研究中細(xì)菌毒素、病毒等侵入腦組織的相關(guān)研究,；

●用于神經(jīng)類藥物研究中,，藥物透過(guò)血腦屏障等相關(guān)研究；

2.昆蟲研究的應(yīng)用：

●用于線蟲,、蠕蟲體內(nèi)藥物,、核酸物質(zhì)或染料注射；

●用于果蠅,、棉鈴蟲,、褐飛虱體內(nèi)藥物,、核酸物質(zhì)或染料注射；

3.用于爪蟾卵細(xì)胞及幼蟾體內(nèi)注射；

4.嚙齒類動(dòng)物的研究應(yīng)用：

●用于大鼠,、小鼠等腦內(nèi)深部組織的藥物、核酸類物質(zhì),、神經(jīng)遞質(zhì)或染料的注射,；

●用于大鼠、小鼠及其他動(dòng)物的器官或組織微損傷藥物,、染料或其他物質(zhì)的注射,。

關(guān)于在納米步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)的顯微注射泵選擇上，NanojectIII和QSI均具有自動(dòng)化程度高,，易于初學(xué)者上手使用快,，操作簡(jiǎn)單,，程控等特點(diǎn)，但是NanojectIII與QSI功能略有不同,，其中QSI前端直接控制的注射針為微量注射器,，為鋼針注射頭，可以注射動(dòng)物組織,，但是如需要注射更微小的細(xì)胞或者為了避免對(duì)活體動(dòng)物造成損傷,，我們建議在鋼針針頭前用熱熔膠接上一段玻璃注射針針頭。而NanojectIII（武漢蓋爾德納科技有限公司提供,，Gairdner Tech）則不需要此熱熔膠轉(zhuǎn)接操作,，因?yàn)樵撔吞?hào)注射泵前端直接配備的為玻璃注射針針頭，可以直接使用,。

各個(gè)科研院所的實(shí)驗(yàn)人員,，在選擇顯微注射泵系統(tǒng)前，應(yīng)該提前統(tǒng)計(jì)和預(yù)估本研究所將要注射的被注射物樣本為哪種,，需要達(dá)到的顯微注射準(zhǔn)確性要求有多高,，本實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算經(jīng)費(fèi)為多少，實(shí)驗(yàn)操作者的技術(shù)水平程度,，以及后續(xù)對(duì)設(shè)備的維護(hù)費(fèi)用,，空間占用率、設(shè)備使用率等方面考慮,，選擇*的顯微注射泵系統(tǒng)選擇方案,。