實驗室組織細(xì)胞破碎方法（超聲波細(xì)胞粉碎機）

實驗室對組織細(xì)胞的破碎方法很多，有機械方法,、物理方法,、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等。

在破碎前,，材料常需要預(yù)處理,，如動物材料要除去與實驗無關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織，脂肪組織和血污等,，植物種子需要除殼,，微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等。不同實驗規(guī)模,、不同實驗材料和實驗要求,，使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織,，如肌肉,、植物的根莖等,，常需要強烈的攪拌或研磨作用，才能把其組織細(xì)胞破壞,。而比較柔軟的組織如肝,、腦等，用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到*破壞細(xì)胞的目的,。對同一實驗材料,，由于實驗?zāi)康模ㄒ螅┑牟煌捎玫钠扑榉绞揭泊嬖谝欢ú町?，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,，前者必須保持十分溫和的條件，以保持分子的完整性,；后者可采用強烈手段,。

　　1． JTONE機械法

　　主要通過機械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機,、勻漿器,、研缽和研磨、壓榨器等,。

　　1）組織搗碎機 一般用于動物組織,、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,，轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。

　　2）勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,，破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機高,。制作勻漿器的材料，除玻璃外,，還可以用硬質(zhì)塑料,、不銹鋼、人造熒光樹脂等,。

　　3）研缽 多用于細(xì)菌或其他堅硬植物材料,，研磨時常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑,，以提高研磨效果,。

　　4）細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器，比研缽具有更大的研磨面積,，而且低部有出口,。操作時先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞*磨碎,。

　　2． JTONE物理法

　　主要通過各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法,。在生化制備中常用的方法有：

　　1）反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,，再緩慢的融化,，反復(fù)多次，多用于動物性材料,。

　　2）急熱驟冷法 將材料投入沸水中,，維持85-90分鐘，至水浴中急速冷卻,，此法可用于細(xì)菌及病毒材料,。

　　3）超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC，功率200-500瓦范圍,，處理時間有數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘不等,，處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料,。

　　3．JTONE化學(xué)及生物化學(xué)法

　　有自溶法,，酶解法和表面活性劑法等。

　　1）自溶法 在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?，利用組織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法,。此過程需較長時間，常用少量防腐劑如甲苯等防止細(xì)胞的污染,。

　　2）酶溶法 利用各種水解酶,，如溶菌酶、纖維素酶,、蝸牛酶,、半纖維素酶、脂酶等,，將細(xì)胞壁分解,，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。有些細(xì)菌對溶菌酶不敏感,，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,，使之轉(zhuǎn)為對溶菌酶敏感而溶解。

3）表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉,、氯化十二烷基吡啶等,。