三,、實驗結果計算

1.一只小鼠可獲得（1～2.5）×108個脾細胞。

2.細胞接種后一般幾小時內(nèi)就能貼壁,，并開始生長,，如接種的細胞密度適宜，5天到一周即可形成單層,。

3.一般情況,，傳代后的細胞在2小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,，2～4天就可在瓶內(nèi)形成單層，需要再次進行傳代,。

四、注意事項

1.取材要求新鮮,，無菌,，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器,，尤其是腸道等,，防止污染脾臟。

2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污,，去除無用組織,，并要防止組織干燥。

3.碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng),，防止組織,、細胞阻塞網(wǎng)孔。

4.計數(shù)前,，注意吸盡平皿里的細胞,，充分混勻，使細胞分散成單個細胞,。

5.實驗操作應在操作臺中央無菌區(qū)域內(nèi)進行,，勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。

6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長,，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,，以免造成組織損傷。

7.另外膠塞過火焰時也不能時間長,，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,，危害培養(yǎng)細胞。

8.吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼,，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜,，再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中。

9.不能用手觸及已消毒器皿瓶口,、瓶塞內(nèi)部,，吸管前部等所有可能與細胞接觸的部分，如已接觸,，要用火焰燒灼消毒或取備品更換,。

10.開啟、關閉長有細胞的培養(yǎng)瓶時,，火焰滅菌時間要短,。防止因溫度過高燒死細胞,。

11.換液時傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸,，速度不能過快,，防止廢液四濺。

12.吹打細胞時,，要注意邊角的細胞是否吹打下來,。

13.手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上，即不可以在開放容器上方操作,。

14.每次操作只處理一株細胞,，以免造成細胞交叉污染。

15.注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心,。操作過程中，應避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,，小心有毒性試劑例如DMSO,，并避免尖銳物品傷人等。

16.從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,，但為對數(shù)生長期細胞,。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液。

17.將凍存管放入液氮容器或從中取出時,，要做好防護工作,，以免凍傷。

18.凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液,。