(1)波長校正:使用光電比色計或分光光度計,,在更換光源燈,、重新安裝、搬運或檢修后,,以及儀器工作不正常時,,都要進行波長校正。就是正常工作的儀器,,每隔一個月也要檢查一次波長,,必要時進行校正,這樣才能保證波長讀數(shù)與通過樣品的波長符合,,保證儀器的較為大靈敏度,。方法常用譜釹濾光片校正法,適用于721型儀可見光區(qū)的波長校正,常以585nm或529nm處的吸收峰或T%為標準,。鑒于721型儀器的出射光波長較寬,,不易將573nm和585nm的兩峰或兩谷分開,校正時易產(chǎn)生誤差,,故推薦用529nm處的峰或谷為標準來進行波長校正,。校正時,將儀器按要求預(yù)熱,。要求電源電壓穩(wěn)定,。波長度盤置580nm處,T%調(diào)至較為大,,在比色杯處放一白紙條,,觀察是否有光強均勻、邊緣無光暈或雜光的光斑,,如不符合要求,,可調(diào)節(jié)燈泡位置使其符合要求,是為波長校正的粗調(diào),。再把靈敏度扭置于“1”(較為低檔),,波長度盤對準529nm,電表機械零點為零,,在光路空白時調(diào)T%為100%T,,并反復(fù)查零點和100%T穩(wěn)定情況。將譜釹濾光片插入光路,,慢慢旋轉(zhuǎn)波長度盤,,找到透光率較為低的一點(向左右微旋波長度盤時,該點透光率值均增加),,這一點即為波長529nm,。檢查波長度盤的指示值是不是529nm,如指示值為534nm,,此時波長工誤差為5nm,,*出規(guī)定(±1nm)必須進行調(diào)整。
調(diào)整方法:將波長度盤對準529nm,,從光路取出譜釹濾光片,,光路空白時調(diào)電表指針到100%T,再將譜釹濾光片插入光路,。打開儀器左側(cè)小蓋板,,找到波長校正螺絲(3個中左側(cè)柄長的一個);反時針方向微微調(diào)節(jié)(負誤差時順時針方向),,使電表指針的指示T%為較為低,。反復(fù)檢查波長誤差情況,,直到符合儀器技術(shù)指標為止。蓋好左側(cè)小蓋板,,校正結(jié)束,。
有些儀器如島津UV-260型雙光束分光光度計,可使用氫燈或置譜釹濾光片于測定比色槽內(nèi),,編入濾工掃描程序后,,儀器即可自動地在一定波長范圍內(nèi)進行波長校正。分光光度儀的光學(xué)系統(tǒng)密封在一個單元組件內(nèi),,若發(fā)生故障,,波長不準,常須請制造商派專人修理,。其它尚有譜線校正法,、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等,,可參考有關(guān)資料,。
(2)線性檢查:線性檢查包括儀器線性及測定方法線性兩個方面的檢查,。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系,,出現(xiàn)正偏離或負偏離的現(xiàn)象。這種偏離,,按比耳定律的現(xiàn)象來自兩個方面:一是溶液本身不符合比耳定律,,這種現(xiàn)象叫做化學(xué)偏離;二是儀器本身各種因素的影響,,使吸光度測定值與濃度之間不成線性關(guān)系,,這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者,。儀器偏離的因素很多,,如雜光、有限帶寬,、檢測器噪聲,、環(huán)境條件變化、波長的變動,、比色杯的誤差,、輻射光的非平行性、檢測器本身的非線性等,。
儀器線性檢查常用一種在一定波長及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色物質(zhì),,配成不同濃度的溶液,來檢查儀器本身是否能如實地反映有色物質(zhì)的濃度變化,。這種檢查方法與任何被測物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學(xué)上的問題無關(guān),。用測得的吸光度對濃度作圖,,在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8,、1.6,、2.4、4.0mg/L伊文藍濃度系列來檢查,,波長用610nm,。
(3)雜光(散光)檢查:在吸光度測定中,,凡檢測器感受到的不需要的輻射都稱為雜光,。雜光對吸光度測定法的準確性有嚴重的影響,但卻往往被忽視,。雜光的來源有:①儀器本身的原因,,如單色器的設(shè)計、光源的光譜分布,、光學(xué)原件的老化程度,、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等;②室內(nèi)光線過強而漏入儀器,,儀器暗室蓋不嚴,;③樣品本身的原因,如樣品有無熒光,、樣品的散射能力強弱等,。
雜光檢測方法:①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測可用10±0.1g/L的碘化na溶液,在240nm處測定的吸光度應(yīng)大于2.00,。此外,,也可用12g/L的氯化家溶液,在220nm處測其透光度,,即為雜光量,,一般應(yīng)小于1%T。以上測定均用石英杯,,以蒸餾水校零,。②在可見光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜釹濾片校正波長,,然后用黑紙片擋住比色杯光路(進口儀器帶有比色杯樣黑色標柱)之后調(diào)整0%T,,再用空氣做空白調(diào)100%T。插入譜釹濾光片,,在585nm處測定,,其測定值即為雜光水平。
?。?)比色杯的質(zhì)量檢查:比色杯一般由玻璃,、石英或熒石制成,,光徑1.0或0.5cm,光線通過時有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失(4%),另一部分(很少)為玻璃吸收,。比色杯的質(zhì)量除其原料外,,再就是玻璃的厚度均勻,上下一致,,各杯彼此相配,。廠家多以四個一套供應(yīng),且杯口上部外面標有箭頭,,箭頭對光源側(cè)使用,。盡管如此,在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查,。常用伊文藍法:將一定量的2.0mg/L的伊文藍溶液注入比色杯中,,比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個比色杯作標準,,用紅色濾光片(波長600~610nm),,用水校零后將此杯的讀數(shù)準確調(diào)至50%T,接著讀取其余杯的透光度,。透光度相差在±0.5%T范圍內(nèi)者為合格,。
?。?)重復(fù)性檢查:在波長,、工作狀態(tài)、電源電壓,、比色杯配套等合格的前提下,,進行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時,,儀器對一種溶液重復(fù)測定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或等于標尺上限值的1%,。試驗方法:將分析純重絡(luò)酸鉀于120~150攝氏度烘干2小時,干燥器中冷卻,。精稱509.1mg于1000ml容量瓶中,,以蒸餾水溶解并加至刻度,混勻(此液180mg/L鉻),。就用液為30,、60、180mg鉻/L,。取波長440nm,,將應(yīng)用液各濃度管連續(xù)測3~5次,各濃度管中較為大誤差小于1%T為合格,。
?。?)靈敏度檢查:將重鉻酸鉀液配制成30和32.5mg鉻/L及120和122.5mg/L鉻的4種應(yīng)用液(濃度差兩組各為2.5mg/L鉻),。波長440nm,以水校零點,,將上述應(yīng)用液連續(xù)測3次吸光度,,兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度值差都不小于0.01為合格。
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