小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒技術(shù)說明
 

本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：  15ng/L -480ng/L
使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中抗雙鏈 DNA 抗體(dsDNA)含量,。

實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中小鼠抗雙鏈 DNA 抗體(dsDNA)水平,。用純化的 抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入抗雙鏈 DNA 抗體(dsDNA),， 再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣 品中的抗雙鏈 DNA 抗體(dsDNA)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,， 通過標(biāo)準曲線計算樣品中小鼠抗雙鏈 DNA 抗體(dsDNA)濃度。

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操作步驟 1. 標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋,。 480ng/L 5 號標(biāo)準品 150μl 的原倍標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液 240ng/L 4 號標(biāo)準品 150μl 的 5 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液 120ng/L 3 號標(biāo)準品 150μl 的 4 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液 60ng/L 2 號標(biāo)準品 150μl 的 3 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液 30ng/L 1 號標(biāo)準品 150μl 的 2 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準孔,、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。   4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次,，拍干,。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。 7. 溫育：操作同 3,。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 15 分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。 11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。

小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒技術(shù)說明操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。

注意事項：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒技術(shù)說明保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6 個月