附件2

食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

BJS 201706

1 范圍

本方法規(guī)定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法,。

本方法適用于包裝飲用水,、液體乳、大米、胡蘿卜,、哈密瓜,、豬肉、魚肉,、茶葉,、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫(yī)學(xué)用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定。

2 原理

試樣經(jīng)提取,、離心后,，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,，內(nèi)標(biāo)法定量,。

3 試劑和材料

3.1 試劑

3.1.1 乙腈（CH₃CN）：色譜純。

3.1.2 甲醇（CH₃OH）：色譜純,。

3.1.3 甲酸（HCOOH）：色譜純,。

3.1.4 甲酸銨（HCOONH₄）：液質(zhì)聯(lián)用級。

3.1.5 超純水（H₂O）：電阻率為 18.2MΩ·cm,。

注：以上試劑在使用前均應(yīng)做本底測試,。

3.2 試劑配制

3.2.1 含 0.1%甲酸的水溶液：量取 1.0mL 甲酸（3.1.3）至 1000mL 容量瓶,，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，混勻,。

3.2.2 20mmol/L 甲酸銨溶液：稱取 0.63g 甲酸銨（3.1.4）,，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至 500mL，混勻,。

3.2.3 甲酸銨甲醇溶液：取 100mL 甲酸銨溶液（3.2.2）,，加入 200mL 甲醇（3.1.2），混勻,。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)品

3.3.1 氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書的標(biāo)準(zhǔn)品或高純試劑,，純度＞99%。中文名稱,、英文名稱,、

CAS 登錄號、分子式,、相對分子量詳見表 1,。

3.3.2 高氯鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書的標(biāo)準(zhǔn)品或高純試劑，純度＞99%,。中文名稱,、英文名稱、

CAS 登錄號,、分子式,、相對分子量詳見表 1。

表 1 氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱,、英文名稱,、CAS 登錄號、分子式,、相對分子量

3.4 同位素內(nèi)標(biāo)

3.4.1 氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：氯酸鹽-¹⁸O₃（200μg/mL,，以氯酸根-¹⁸O₃ 離子計(jì)，北京振祥提供,，

EURL-SRMLotNo:024）,，4℃保存。

3.4.2 高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：高氯酸鹽-¹⁸O（₄ 100μg/mL,，以高氯酸根-¹⁸O₄離子計(jì),，美國劍橋提供，

CILOLM-7310-1.2）,，4℃保存,。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.5.1 氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL，以氯酸根計(jì)）：精密稱取氯酸鈉 0.128g（至 0.0001g）,，置于 100mL 容量瓶中,，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻,，制成濃度為 1mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲備液,，4℃保存。

3.5.2 高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL,，以高氯酸根計(jì)）：精密稱取高氯酸鈉 0.123g（至 0.0001g）,，置于 100mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度,，搖勻,，制成濃度為 1mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲備液，4℃保存,。

3.5.3 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取 0.2mL 氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.5.1）,、0.1mL 高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.5.2），置于同一 100mL 容量瓶中,，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度,，搖勻，制成氯酸鹽,、高氯酸鹽濃度分別為 2.0µg/mL,、1.0µg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4℃保存,。

3.5.4 混合同位素內(nèi)標(biāo)液：分別準(zhǔn)確量取 75µL 氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.1）,、20µL 高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.2）置于同一 10.0mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度,，搖勻,，制成氯酸鹽-¹⁸O₃、高氯酸鹽-¹⁸O₄濃度分別為 1500ng/mL,、200ng/mL 的混合同位素內(nèi)標(biāo)液,，4℃保存。

3.5.5 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.5.3）0μL,、10μL,、25μL、50μL,、75μL,、

100μL、250μL,、500μL,、750μL、1000μL,，及混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）100μL,，用甲酸銨甲醇溶液（3.2.3）稀釋并定容至 10mL,，作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 S0、S1—S9,。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL,、

2.00ng/mL、5.00ng/mL,、10.0ng/mL,、15.0ng/mL、20.0ng/mL,、50.0ng/mL,、100ng/mL、150ng/mL,、 200ng/mL,，高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、1.00ng/mL,、2.50ng/mL,、5.00ng/mL、7.50ng/mL,、

10.0ng/mL,、25.0ng/mL、50.0ng/mL,、75.0ng/mL,、100ng/mL，混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽-¹⁸O₃,、高氯酸鹽-¹⁸O₄ 濃度分別為 15.0ng/mL,、2.0ng/mL，或依需要配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,。臨用新制,。

4 儀器和設(shè)備

4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI 源）,。

4.2 渦旋振蕩器,。

4.3 組織搗碎機(jī)。

4.4 均質(zhì)器,。

4.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min,。

4.6 電子天平：感量分別為 0.0001g 和 0.001g。

4.7 超聲波恒溫水浴振蕩器,。

4.8 具塞離心管：50mL,。

4.9 PRiMEHLB 固相萃取柱：3cc，150mm，或性能相當(dāng)者,。

注：4.8,、4.9 的耗材在使用前均應(yīng)做本底測試。

5 試樣制備與保存

5.1 包裝飲用水

充分混勻,，直接取用,。

5.2 液體乳：

充分搖勻，取適量有代表性的試樣,，均分成兩份，作為試樣和留樣,，分別裝入潔凈容器中,，密封并標(biāo)記，于4℃避光保存,。

5.3 豬肉,、魚肉：

取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊,，組織搗碎機(jī)搗碎,，均分成兩份，作為試樣和留樣,，分別裝入潔凈容器中,，密封并標(biāo)記，于-18℃避光保存,。

5.4 胡蘿卜,、哈密瓜：

取適量有代表性的試樣，去皮去籽,，切成小塊,，組織搗碎機(jī)搗碎，均分成兩份,，作為試樣和留樣,，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記,，于-18℃避光保存,。

5.5 嬰兒配方乳粉：

充分混勻，取適量有代表性的試樣,，均分成兩份,，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中,，密封并標(biāo)記,，于常溫避光保存。

5.6 大米,、茶葉：

取適量有代表性的試樣,，粉碎機(jī)粉碎后過40目篩,，均分成兩份，作為試樣和留樣,，分別裝入潔凈容器中,，密封并標(biāo)記，于常溫避光保存,。

6 測定步驟

6.1 提取

6.1.1 包裝飲用水：

準(zhǔn)確移取1.0mL試樣,，加入10.0µL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），渦旋震蕩10s,，經(jīng)0.22µm再生纖維素濾膜過濾后,，取續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

6.1.2 胡蘿卜,、哈密瓜,、茶葉：

準(zhǔn)確稱取1g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200μL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）,，準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（3.1.5）,，渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（3.1.2）,，混勻,，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min,，取上清液待凈化,。

6.1.3 大米：

準(zhǔn)確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200μL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）,，準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（3.1.5）,，渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（3.1.2）,，混勻,，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min,，取上清液待凈化,。

6.1.4 嬰兒配方乳粉：

準(zhǔn)確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150μL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）,，準(zhǔn)確加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1）,，迅速混勻，置于45℃水浴超聲20min,，渦旋振蕩5min,，再準(zhǔn)確加入10.0mL甲醇（3.1.2），混勻，10000r/min常溫離心10min,，取上清液待凈化,。

6.1.5 液體乳：

準(zhǔn)確稱取5g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150μL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）,，加入1.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1）,，9.0mL甲醇（3.1.2），渦旋振蕩5min,，10000r/min 常溫離心10min,，取上清液待凈化。

6.1.6 豬肉,、魚肉：

準(zhǔn)確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中,，加入200μL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（3.1.5）,，13.0mL甲醇（3.1.2），10000r/min均質(zhì)30s,，10000r/min 常溫離心10min,，取上清液待凈化。

6.2 凈化

吸取約3.0mL上述上清液（6.1.2~6.1.6）,，按附錄A中的圖A.1方式過固相萃取柱（4.9）及0.22µm 再生纖維素濾膜,，棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液,，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定,。

6.3 色譜測定

6.3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測

6.3.1.1 參考液相色譜條件

a)色譜柱：AcclaimTRINITYP1 復(fù)合離子交換柱（50mm×2.1mm，3μm,；100mm×2.1mm,，3μm），或性能相當(dāng)者,。

b)流動(dòng)相：A 為乙腈,，B 為 20mmol/L 甲酸銨溶液。梯度洗脫程序見表 2,。 c)樣品系列運(yùn)行完后,，按表 3 的色譜柱清洗梯度程序?qū)ιV柱進(jìn)行清洗。

d)流速：0.5mL/min   

e)柱溫：35℃,。

f)進(jìn)樣量：3μL,。

表 2 梯度洗脫程序

表 3 色譜柱清洗梯度程序

注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長色譜柱壽命,。

6.3.1.2 參考質(zhì)譜條件

a)離子源：電噴霧離子源（ESI 源）,。 b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

c)掃描方式：負(fù)離子模式掃描,。

d)毛細(xì)管電壓：200V,。

e)錐孔電壓：60V。

f)脫溶劑溫度：500℃,。

g)脫溶劑氣流量：1000L/h,。

h)錐孔氣流量：150L/h。

i)采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式采集數(shù)據(jù),，質(zhì)譜參數(shù)見表 4,。

表 4 氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)

^*定量離子對,。

注：6.3.1.2 的質(zhì)譜條件僅供參考,，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異,，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到佳,。

6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.3.1）進(jìn)行測定。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),，以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,。

6.3.3 定性測定

在相同試驗(yàn)條件下測定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽,、高氯酸鹽的色譜保留時(shí)間,，以相對于強(qiáng)離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）中氯酸鹽,、高氯酸鹽保留時(shí)間一致的色譜峰,，且其定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表5規(guī)定的范圍,，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)的氯酸鹽,、高氯酸鹽。

表 5 定性確證時(shí)相對離子豐度的大允許偏差

6.3.4 定量測定

若試樣檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）一致的氯酸鹽,、高氯酸鹽,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按內(nèi)標(biāo)法以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值計(jì)算得到其含量。

空白樣品加標(biāo)試樣參考色譜圖見附錄B中的圖B.1,、B.2,。

6.4 空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按試樣同法操作,。

7 結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

  ………………………………………….(1)

式中：

X—試樣中各待測組分的含量,，包裝飲用水單位為微克每升（µg/L),，其他樣品單位為微克每千克（µg/kg)；

c—從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度,，單位為納克每毫升（ng/mL）,；

V—試樣溶液終定容體積，單位為毫升（mL）,； f—試樣制備過程中的稀釋倍數(shù),；

m—稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（mL）,，其他樣品單位為克（g）,。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字,。

8 檢測方法的靈敏度,、準(zhǔn)確度、精密度

8.1 靈敏度

當(dāng)試樣量為 1.0mL 時(shí),，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為 0.6μg/L,、定量限為 2.0μg/L；高氯酸鹽的檢出限為 0.4μg/L,、定量限為 1.0μg/L,。

當(dāng)試樣量為 1g（至 0.001g）、定容體積為 20.0mL 時(shí),，胡蘿卜、哈密瓜,、茶葉中氯酸鹽

的檢出限為 12.0μg/kg,、定量限為 40.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為 8.0μg/kg,、定量限為 20.0μg/kg,。

當(dāng)試樣量為 2g（至 0.001g）、定容體積為 20.0mL 時(shí),，豬肉,、魚肉、大米中氯酸鹽的檢

出限為 6.0μg/kg,、定量限為 20.0μg/kg,；高氯酸鹽的檢出限為 4.0μg/kg、定量限為 10.0μg/kg,。

當(dāng)試樣量為5（至g 0.001g）,、定容體積為15.0mL時(shí)，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8μg/kg,、定量限為 6.0μg/kg,；高氯酸鹽的檢出限為 1.2μg/kg,、定量限為 3.0μg/kg。

當(dāng)試樣量為 2g（至 0.001g）,、定容體積為 15.0mL 時(shí),，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限為 4.5μg/kg、定量限為 15.0μg/kg,；高氯酸鹽的檢出限為 3.0μg/kg,、定量限為 7.5μg/kg。

8.2 準(zhǔn)確度

本方法在 5~800µg/kg 添加濃度范圍內(nèi),，回收率為 80%~110%,。

8.3 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的 20%。

  A

附錄A

凈化方式示意圖

圖A.1 9 種基質(zhì)樣液凈化方式示意圖

  A

附錄B

氯酸鹽,、高氯酸鹽特征離子色譜圖

圖A.2 氯酸鹽,、高氯酸鹽特征離子色譜圖（50mm×2.1mm，3μm 規(guī)格色譜柱）

注：氯酸鹽-¹⁸O₃內(nèi)標(biāo),、氯酸鹽特征離子色譜圖中,，3.05min處為高氯酸鹽-¹⁸O₄內(nèi)標(biāo)、高氯酸鹽的碎片離子峰,。

圖A.3 氯酸鹽,、高氯酸鹽特征離子色譜圖（100mm×2.1mm，3μm 規(guī)格色譜柱）

注：氯酸鹽-¹⁸O₃ 內(nèi)標(biāo),、氯酸鹽特征離子色譜圖中,，2.65、2.64min 處為高氯酸鹽-¹⁸O₄ 內(nèi)標(biāo),、高氯酸鹽的碎片離子峰,。