作為微孔板比色計(jì)的酶標(biāo)儀,，其基本功能不外乎一個(gè)比色測定，所不同的是在測定波長范圍,、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng),、檢測速度,、震板功能、溫度控制,、定性和定量測定軟件功能等方面的差異,，當(dāng)然全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)還具有自動(dòng)洗板、溫育,、加樣等功能,。在臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)人員在使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定操作時(shí),，有時(shí)難免會(huì)對(duì)酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)產(chǎn)生迷惑,，甚至對(duì)酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生錯(cuò)誤的理解,。如諸如使用酶標(biāo)儀較用肉眼觀察測定的陽性率明顯增加這樣的問題。
 

　　一,、測定波長目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下,，經(jīng)HRP作用,，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí),，DAB在450nm波長處有zui大吸收,，當(dāng)pH值降為L0時(shí)，zui大吸收波長移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大,，顯色加深,，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有zui大消光系數(shù),，如果HRP量少,，H:O:和TMB過量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽離子根,。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個(gè)波長是目前ELISA測定zui常用的,。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件,，可以同時(shí)安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個(gè)波長,，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,，影響不大一般酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，*可以滿足ELISA的顯色測定,。,。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要,，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時(shí),，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定,，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對(duì)其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能，此時(shí)需要一個(gè)340nm波長濾光片,。此時(shí),，酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對(duì)顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定,；而“雙波長”則除了用對(duì)顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定外,，同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長如630nm進(jìn)行測定，酶標(biāo)儀zui后打印出來的吸光度則為二者之差,。630nm波長下得到的吸光度是非特異的,，來自于板子上諸如指紋、灰塵,、臟物等所致的吸收,。因此，在ELISA比色測定中,，使用雙波長,，且不必設(shè)空白孔。
 

　　二,、測定的吸光度范圍通常,，酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求,。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上,，并且能保持很好的精密度與線性,。如Labsystems公司DragonWellscanMK-2的吸光度測定范圍為0-3.5，而MultiskanAscent的吸光度測定范圍(Abs)達(dá)0-4.0,，在0-4.0范圍,，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi),，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內(nèi),，測定精密度CV小于士0.2%,。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何,。
 

　　三、光學(xué)系統(tǒng)酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,，亦有單通道)檢測,，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外,，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道,，每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍,、線性度,、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話,，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳,。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異,。