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25格×16格的血球計(jì)數(shù)板使用方法介紹

來(lái)源:上海子實(shí)生物科技有限公司   2017年06月26日 12:05  

血球計(jì)數(shù)板介紹用厚玻璃制成,。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱,,將特制的蓋玻片覆蓋其上,,形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池畫(huà)有長(zhǎng),、寬各3.0mm的方格,,分為9個(gè)大方格,每個(gè)大格面積為1.0mm,。容積為0.1mm(ul),,其中,中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格,,位于正中及四角5個(gè)中方格是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域,,用單線劃分為16個(gè)小方格。

四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域,,用單線劃分為16個(gè)中方格,。根椐標(biāo)準(zhǔn)局(NBS)規(guī)定,大方格每邊長(zhǎng)度允許誤差為±1%,。 

使用方法:

1.視待測(cè)菌懸液濃度,,加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度,。 

2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。 

3.將菌懸液搖勻,,用滴管吸取少許,,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過(guò)多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),,勿使氣泡產(chǎn)生,,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,,以免加蓋蓋玻片后,,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡),。 

4.靜置片刻,,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移,。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),,先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù),。由于細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。 

5.25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),,除數(shù)上述四個(gè)大方格外,,還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,,在計(jì)數(shù)時(shí),對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定,。如菌體位于大方格的雙線上,,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,,以減少誤差,。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中,。

6.對(duì)于出芽的酵母菌,,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算,。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大,,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量,。 

7.測(cè)數(shù)完畢,,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,,切勿用硬物洗刷或抹擦,,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,,放入盒內(nèi)保存,。 

計(jì)數(shù)公式:

25格×16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式:

細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)

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