廣西凱氏定氮儀原理及操作步驟

凱氏定氮儀原理：      

蛋白質是含氮的有機化合物,。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解,，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨,。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,，根據酸的消耗量乘以換算系數,，即為蛋白質含量。  

1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4,，濃H2SO4 作用下,，硝化生成(NH4)2SO4  

反應式為：2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化劑)   

2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3 ,，收集于H3BO3 溶液中 

反應式為: (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4   2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O   

3.用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然后乘以相應的換算因子,，既得蛋白質的含量 

反應式為：  

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

凱氏定氮儀操作步驟：

(一)消化       

1,、準備6個凱氏燒瓶，標號,。1,、2、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL,，樣品要加到燒瓶底部,，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g，濃硫酸2.0mL,，30%過氧化氫1.0mL,。4、5,、6號燒瓶作為空白對照,，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質，對樣品測定進行校正,。4,、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,，其余所加試劑與1,、2、3號燒瓶相同,。      

2、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上,，接好抽氣裝置,。先用微火加熱煮沸，此時燒瓶內物質炭化變黑,，并產生大量泡沫,，務必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產生后,，加大火力,，保持瓶內液體微沸，至溶液澄清后,，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min,。在消化過程中要隨時轉動燒瓶，以使內壁粘著物質均能流入底部,，以保證樣品*消化,。消化時放出的氣體內含SO2，具有強烈刺激性,，因此自始自終應打開抽水泵將氣體抽入自來水排出,。整個消化過程均應在通風櫥中進行。消化*后,，關閉火焰,，使燒瓶冷卻至室溫。

(二)蒸餾和吸收       

蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的,。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多,，大體上都由蒸氣發(fā)生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。

1. 儀器的洗滌      

儀器安裝前,，各部件需經一般方法洗滌干凈,，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中,，煮約10min,，水洗、水煮10min,，再水洗數次,，然后安裝并固定在一只鐵架臺上。

     儀器使用前,，微量全部管道都須經水蒸氣洗滌,，以除去管道內可能殘留的氨，正在使用的儀器,，每次測樣前,，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器,，重復蒸氣洗滌,，不得少于三次，并檢查儀器是否正常,。仔細檢查各個連接處,，保證不漏氣。      

首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水,，加入數滴硫酸使其保持酸性,，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，并放入少許沸石(或毛細管等),，以防爆沸,。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經插管流入反應室，但玻杯內的水不要放光,，塞上棒狀玻塞,，保持水封，防止漏氣,。蒸氣發(fā)生后,，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣只能進入反應室,，導致反應室內的水迅速沸騰,，蒸出蒸氣由反應室上端口通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水,。從定氮球發(fā)燙開始計時,，連續(xù)蒸煮5min,，然后移開煤氣燈。沖洗完畢,，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,，由于氣體冷卻壓力降低，反應室內廢液自動抽到反應室外殼中,，打開廢液排出口夾子放出廢液,。如此清洗2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口*浸沒在溶液中,，蒸餾1～2min,，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色,，表示蒸餾裝置內部已洗干凈,。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min,，用蒸餾水沖洗冷凝器下口,，關閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用,。

1. 無機氮標準樣品的蒸餾吸收     

  由于定氮操作繁瑣,，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術，初學者宜先用無機氮標準樣品進行反復練習,，再進行有機氮未知樣品的測量