色譜柱的正確使用和維護十分重要,，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中，需要注意下列問題,，以保證色譜柱的使用壽命,。

1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況,；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行,，在閥進樣時閥的轉動不能過緩,。

2、應逐漸改變溶劑的組成,，特別是反相色譜中,，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/span>

3,、一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質,。否則反沖會迅速降低柱效,。

5、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,，清除保留在柱內的雜質,。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,。下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：

6,、保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間,。

7,、色譜柱使用過程中，如果壓力升高,，一種可能是燒結濾片被堵塞,，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內,，使柱頭被污染,；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,，死體積增大,。在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭,，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平,。然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱，壓平,，再擰緊柱接頭,。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平,。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm),，可以起到保護,、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,，這是值得的,。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料,，只能在pH2-9范圍內使用,。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂,，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/span>

8,、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降,，這時也可補加填料使柱效恢復,。每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗,，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡,。當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗,。含鹵族元素(氟,、氯,、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸,。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,，應每隔4-5天開機沖洗15分鐘。