*:牛流行性腹瀉病毒PCR-熒光探針試劑盒評估試劑的實(shí)用性,,試劑的穩(wěn)定與否,,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,,應(yīng)進(jìn)行陰,、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用,。
第二:操作前仔細(xì)閱讀說明書,,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用,。值得改進(jìn)的地方,,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數(shù)的掌握等,。
第三:加樣要準(zhǔn)確,、快速。加樣不準(zhǔn)確,,酶生成物的量不能確定,,直接影響顯色結(jié)果。另外,,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),,所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),,如果加樣遲緩,,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時(shí)間暴露在外,,尤其室溫過高時(shí),,保存期會縮短甚至失效。
第四:檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器,、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,,牛流行性腹瀉病毒PCR-熒光探針試劑盒對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決,。
第五:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要
第六:嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,,顯色時(shí)間過短,,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,,易出現(xiàn)假陰性,。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽性,,這可能與試劑本身有關(guān),。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽性,,這可能是本底顯色的結(jié)果,。
第七:洗滌*,洗板不*,,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性,。另外,洗滌液要新鮮,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性,。
第八:牛流行性腹瀉病毒PCR-熒光探針試劑盒嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,,反應(yīng)時(shí)間過長,酶失活,;反應(yīng)時(shí)間過短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,,容易洗掉,,都可能造成假陰性。
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